点随有机相移动而进入无溶质的区域，这时又重新进行分配，一部分溶质从有机相进入水相。当有机相不断流动时，溶质就沿着有机相流动的方向移动，不断进行分配。溶质中各组分的分配系数不同，移动速率也不同，因而可以彼此分开。物质被分离后在纸层析图谱上的位置是用Rf值（比移）来表示的。Rf＝原点到层析点中心的距离原点到溶剂前沿的距离
在一定的条件下某种物质的Rf值是常数。Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、PH层析滤纸的质量和层析温度等因素有关。氨基酸、糖、核甘酸、甾体激素、维生素、抗生素等很多物质都能用纸上层析法分离。上层层析、下层层析、单向层析、双向层析。三、仪器、材料和试剂仪器：每组学生准备尺子、小剪子或小刀1．层析缸、培养皿、量筒、小烧杯、长颈漏斗、毛细管、吹风机、电热鼓风干燥箱、层析滤纸、手套、透明胶带。实验材料和试剂1．标准氨基酸溶液分别配制05的Lys、Ala、Ile、Met溶液2．待分离测定的混合氨基酸溶液３．显色剂01水合茚三酮丙酮溶液。４．扩展剂（展层剂）：本实验使用酸溶剂系统
f酸溶剂系统：正丁醇80甲酸水＝1532（体积比），平衡溶剂与扩展剂相同。四、操作步骤１．层析缸：三个组共用一个。层析缸中放入三个培养皿（注意垫平）。２．配制酸溶液系统：每组用量筒用配制30ml入小烧杯，再放入层析缸中，作为平衡溶剂，密闭。问题：平衡溶剂的作用是？3．戴手套取层析滤纸一张。在纸的一端纵纹距边缘152cm处用铅笔划一条直线，而后进行分隔（５个点）。问题：为什么戴手套取层析滤纸？4．练习点样：用毛细管吸水在滤纸条上练习。达到均匀透过滤纸，大小不超过3mm的点样迹。5．正式点样：用毛细管将各氨基酸样品分别点在这5个位置上，干后再点一次。注意：两次点样一定不要将不同的样品点在一个点上。小组成员认真仔细合作。不要用手触摸到滤纸。6．点样面朝外，纸的两边不能接触。用胶带小条（12mm宽）将滤纸粘成筒状。7．将筒状滤纸直立于培养皿中（点样的一端在下），盖上层析缸盖，平衡约10分钟。8．将长颈漏斗置于筒状滤纸中并与培养皿底部接触，将约25mL左右扩展剂（即平衡溶剂）沿长颈漏斗倾于培养皿，扩展剂的液面需低于点样线1cm。密闭。问题：为什么加入的展层剂的液面需低于点样线？9．展层：当溶剂展层至距离纸的上沿约1厘米时，取出滤纸，立即用铅笔标出溶剂前沿界线，自然干燥或用吹风机热风吹干。10．显色：将已层析的滤纸用摄子夹住边，在r