染液（5）封片剂：中性树胶（6）其他：小镊子，棉棒，载玻片，盖玻片
操作步骤
（1）所有细胞培养试剂和Tra
swellchamber放在37℃温育；（2）待测细胞培养至对数生长期，消化细胞，用PBS和无血清培养基先后洗涤
一次，用无血清培养基悬浮细胞，计数，调整浓度为2×105ml；（3）在下室（即24孔板底部）加入600－800μl含10％血清的培养基，上室
加入100－150μl细胞悬液，继续在孵箱培养24小时；（4）用镊子小心取出chamber，吸干上室液体，移到预先加入约800μl甲醇的
孔中，室温固定30分钟；（5）取出chamber，吸干上室固定液，移到预先加入约800μlGiemsa染液的
孔中，室温染色15－30分钟；（6）轻轻用清水冲洗浸泡数次，取出chamber，吸去上室液体，用湿棉棒小心
擦去上室底部膜表面上的细胞；（7）用小镊子小心揭下膜，底面朝上晾干，移至载玻片上用中性树胶封片；（8）显微镜下取9个随机视野计数，统计结果。
注意事项
（1）根据待测细胞体积大小选择合适孔径的chamber。常用的为80μm孔径（如AGS细胞），如果细胞体积较大可以考虑用10μm孔径；
（2）根据待测细胞的迁移能力强弱调整细胞数和迁移时间。常规24wellchamber接种细胞数约为2≈5×104well，迁移时间12≈36小时；
（3）由于Cor
i
g公司的24Tra
swell内含12个独立的chamber，为了避免操作污染，每次实验可预先另准备一块24孔普通培养板（Cor
i
g）；
（4）如果细胞迁移能力较弱，下室液体可用3T3细胞无血清培养24小时获得的上清加50μgmlFN（Fibro
ecti
），具体可查阅相关文献；
（5）细胞悬液加入膜中央，尽量保证液面水平；（6）固定染色擦洗时动作小心，避免擦去膜底面的细胞。但一定要充分擦净膜
表面上未迁移的细胞，以免影响读数。尤其是膜周边上可用细牙签或小镊子缠上湿棉花擦洗，但要小心避免将膜戳破；
f（7）Chamber和膜上都无法标记，操作时应小心避免混淆实验组和对照组；（8）充分晾干，避免残留水分导致镜下聚焦不一致。
细胞侵袭实验（celli
vasio
assay）
实验材料
（1）MatrigelBD5mgml，20℃保存（2）其余材料同迁移实验
操作步骤
（1）Matrigel在4℃过夜融化；（2）用4℃预冷的无血清培养基稀释Matrigel至终浓度1mgml，冰上操作；（3）在chamber上室底部中央垂直加入100μl稀释后的Matrigel，37℃温育4
－5小时使其干成胶状；（4）后续步骤同迁移实验（18）。
注意事项
（1）Matrigel在过高或过低的温度均易凝固，因此操作所需枪头和离心管应提前在4℃预冷；
（2）铺胶时保证液面水平，胶的厚度均匀一致，切勿r