rtbufferSeeTable1b、Elutio
bufferStartbuffer1MNaCl
Table1SuggestedbufferforvariouspHi
tervals
Cou
terio

Co
ce
tratio

Buffersforcatio
excha
gersSPCM
CitrateNa
20mM
AcetateNa
50mM
PhosphateNa
50mM
Buffersfora
io
excha
gersQDEAE
TrisCl
20mM
pKa25oC
31486448
2172123
81
2样品准备：样品需用脱盐柱换成startbuffer。
3样品纯化：
a、用startbuffer以1mlmi
洗涤5ml；
b、用elutio
buffer以1mlmi
洗涤5ml；
c、用startbuffer510ml平衡层析柱；
d、上样；
e、用startbuffer510ml洗涤层析柱；
f、用elutio
buffer以0100的阶段或连续梯度洗脱20ml以上。
4层析柱清洗CIP：
2MNaCl以1mlmim反向清洗10个柱体积；1MNaOH以1mlmim反向洗40mi
。
f25凝胶过滤GF
Separatio
ra
geMr1000030007000010000600000
Superdex30pgSuperdex75pgSuperdex200pg
Colum
volume
319330ml
Samplevolume
Upto13ml
Recomme
dedflowrate
25mlmi

Maxflowrate
425mlmi

Maximumpressure
05MPa5bar73psi
pHstability
lo
gterma
dworki
gra
ge312shortterm114
Solutio
si
whichthemediaisstable1Maceticacid1Msodiumhydroxide8Murea6Mgua
idi
ehydrochloride30isopropa
ol30aceto
itrile70etha
ol
Storage20etha
ol
1缓冲液：根据需要使用相应的缓冲体系。通常为了减少非特异性吸附缓冲液一般需加
入至少015MNaCl。PBSpH74是常用的缓冲液。2层析柱准备：上样前用2柱体积elutio
buffer平衡。3层析柱清洗CIP：05MNaOH以05mlmi
反向清洗12hours。
f三、蛋白浓度测定（Bradford法）
1、取7根试管，按表1进行配比2、配比后，室温下静置5mi
后，以0号管为对照，测定OD595。以BSA含量为横坐标，对应的吸收值为纵坐标绘制标准曲线。3、待测蛋白质浓度的样品，取其适量（以不超过标准曲线范围为限），用015mMNaCl补加体积至100ul，测定OD595。根据标准曲线，计算出相应的蛋白质含量。
表1：Bradford法测定蛋白质浓度Table1Protei
co
ce
tratio
assaybyBradfordmethod
1mgmlBSAul015mMNaClulBradford工作液ml
012345601020406080100100908060402005555555
fr