人胆囊收缩素CCK8ELISA试剂盒用于血清、血浆、细胞培养上清液和其它生物体液内原理本实验采用双抗体夹心ABCELISA法。用抗人CCK8单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的CCK8与单抗结合，加入生物素化的抗人CCK8，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidi
与生物素结合，加入底物工作液显蓝色，最后加终止液硫酸，在450
m处测OD值，CCK8浓度与OD值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中CCK8浓度。试剂盒组成（28℃保存）酶标板（CoatedWells）10×标本稀释液（SampleBuffer）标准品（Sta
dards）：80
g瓶第一抗体工作液（Bioti
ylatedA
tibody）准备试剂与收集血样1收集标本：血清、血浆（EDTA）、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测，28℃保存48小时；标准品液配制：使用前加入1ml蒸馏水混匀，配成80
gml的溶液。设标准管8管，每管加入标更长时间须冷冻（20℃或70℃）保存，避免反复冻融。2本稀释液300ul。在第一管中加入80
gml的标准品溶液300ul混匀后用加样器吸出300ul，移至第二管。如此反复作对倍稀释，从第七管中吸出300ul弃去。第八管为空白对照。34检测程序123456789加样：每孔各加入标准品或待测样品100ul，将反应板充分混匀后置37℃120分钟。洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤46次，向滤纸上印干。每孔中加入第一抗体工作液100ul。将反应板充分混匀后置37℃60分钟。洗板：同前。每孔加酶标抗体工作液100ul。将反应板置37℃30分钟。洗板：同前。每孔加入底物工作液100ul，置37℃暗处反应15分钟。每孔加入100ul终止液混匀。30分钟内用酶标仪在450
m处测吸光值。所有OD值都应减除空白值后再行计算。以标准品40、20、10、5、25、125、0625、0
gml为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上根据样品OD值在该曲线图上查出相应CCK8含量。灵敏度：最小的CCK8检测浓度小于03
gml。10×标本稀释液用蒸馏水作110倍稀释（示例：1ml浓稀释液9ml蒸馏水）。洗涤液：用重蒸水120稀释（示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水）96孔12ml2瓶12ml酶标抗体工作液（E
zymeCo
jugate）20×浓缩洗涤液（WashBuffer）底物工作液（TMBSolutio
）终止液（StopSolutio
）12ml50ml12ml12ml
结果计算与判断12
作图，画出标准曲线。3试剂盒性能123注意事项12以上标准孔及待测样品均建议做复孔，每次测定应同时做标准曲线。板条开封后剩余板条要再封好，保持板条干燥。洗涤过程很关键。洗涤不充分将导致精确度误差及OD值错误地升高。3特异性：可同时检测重组或天然的人r