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成分的分离及新药的开发与研制,其具有
f价格便宜、稳定性高、吸附快、吸附容量大、洗脱率高、解吸条件温和、再生简便、使用周期长等优点。本试验应用大孔吸附树脂对辣蓼总黄酮进行分离纯化,探讨静态及动态吸附过程中多种因素对吸附及解吸效果的影响,为开发利用辣蓼提供依据。
1仪器与试药
R3旋转蒸发仪(BUCHI),V700真空泵(BUCHI),超声波清洗机(SB5200DTDN,宁波新芝生物科技股份有限公司),紫外分光光度计(UV1750,岛津),纯水仪(CDUPT1,成都纯越科技有限公司),分析天平(EL204,METTLERTOLEDO)。D101、DM130、XDA8、AB8大孔树脂,西安蓝晓科技。
辣蓼,南宁市山草堂,批号20160519,烘干除杂后粉碎备用。芦丁对照品,中国食品药品检定研究院,批号100080200707。
2方法与结果
21辣蓼总黄酮的提取
取辣蓼粉末(过100目筛),按料液比为1∶30与pH48的HAcNaAc缓冲液混合,加入025纤维素酶与果酶,50℃超声处理15h,之后用Na2CO3溶液调pH至90,于85℃水浴15mi
使酶灭活。加入纯乙醇使酶解液中醇浓度为60,浸提24h,回收浸提液,滤渣按1∶30料液比再加入60乙醇溶液重复浸提1次,过滤,合并2次滤液,滤液经过石油醚、氯仿、乙酸乙酯及正丁醇萃取。收集辣蓼黄酮乙酸乙酯部位与辣蓼黄酮正丁醇部位,减压蒸干,备用。
22黄酮含量测定
221对照品溶液的制备
精密称取120℃干燥至恒重的芦丁对照品10mg,加入60乙醇溶液,充分溶解,并定容至50mL容量瓶中,摇匀,即得浓度为02mgmL的芦丁对照品溶液。
222测定波长的选择与标准曲线的绘制
准确移取芦丁对照品溶液(02mgmL)0、04、08、16、24、32、36mL分别置于10mL容量瓶中,加入60乙醇至5mL,加5NaNO2溶液05mL,摇匀静置6mi
,再加入10Al(NO3)3溶液05mL,摇匀后静置5mi
,加1molLNaOH溶液4mL,边滴入边摇匀,以60乙醇溶液定容至10mL,摇匀后静置15mi
。对芦丁对照品溶液显色后用1cm比色皿在波长400~700
m区间扫描,确定最大吸收波长。以第1管溶液作空白,分别测定吸光度,以总黄酮浓度为纵坐标,吸光度为横坐标,绘制标准曲线。
f223样品测定
将辣蓼黄酮乙酸乙酯部位与正丁醇部位充分溶解,取样品液1mL,按照标准曲线制作的显色程序各取3份进行平行测定,记录最大吸收下的吸光度值,代入标准曲线方程,计算总黄酮含量。
23大孔吸附树脂吸附试验
231大孔吸附树脂的预处理
取一定量树脂,用无水乙醇浸泡24h充分溶胀后装柱。用95乙醇冲洗,直到流出液r
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