实验四植物基因组DNA的提取
实验目的通过本实验学习从植物组织中提取DNA的方法。实验原理利用液氮对植物组织进行研磨，从而破碎细胞。细胞提取液中含有的SDS溶解膜蛋白而破坏细胞膜，使蛋白质变性而沉淀下来。EDTA抑制DNA酶的活性。再用酚、氯仿抽提的方法去除蛋白，得到的DNA溶液经乙醇沉淀。实验材料新鲜植物叶片【仪器、材料与试剂】（－）仪器1．低温离心机2．恒温水浴器3．台式离心机4．紫外分光光度计5液氮灌（二）材料l。三羟甲基氨基甲烷（Tris）2．乙二胺四乙酸（EDTA）3．氯化钠（NaCl）4．β巯基乙醇5．氯化钾（KCI）6．异丙醇7．乙醇8．陶瓷研钵9．吸头、小指管（三）试剂（三）试剂1．细胞提取液100mmol／LpH
f5mmol／LEDTApH
500mmol／LNaCl
％
SDS
1mol／Lβ巯基乙醇
2．5mol／LKCI
3，TE（见实验二质粒DNA的提取及酶切）
实验步骤
1取4g新鲜叶片，在液氮中研磨成粉末状（越细越好）。
2转移至50ml离心管中，加入16mlTENbf，充分混匀。65℃水浴保温20mi
。
3从水浴中取出离心管，加入5ml5molLKCl溶液，混匀，水浴20mi
。
44000rmi
离心20mi
。
5将上清液转移到另一50ml离心管中。
6加等体积酚／氯仿混匀，12000r／mi
离心5mi
，取上清。
7加等体积氯仿，混匀，12000r／mi
离心5mi
，取上清。
8加入－1倍体积的异丙醇（沉淀DNA），混匀。放置时间
9离心获得沉淀，70％乙醇洗3次。风干沉淀。
10加入3mlTE缓冲液，溶解DNA。
11取3mlDNA溶液测定DNA在260
m和280
m的OD值，并分析DNA的纯度
和含量
实验结果
注意事项
1尽量取材幼嫩叶片，如太老，酚类物质多，必须用10mM的βME处理。
叶片磨得越细越好。
2移液器的使用。
3由于植物细胞中含有大量的DNA酶，因此，除在抽提液中加入EDTA抑制酶
的活性外，第一步的操作应迅速，以免组织解冻，导致细胞裂解，释放出DNA
酶，使DNA降解。
f4研钵预冻，粉末至加CTAB前不要融化。5氯仿异戊醇抽提时动作应轻柔。6所用试剂必需灭菌。
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