的96孔板内，每孔加100μl。一般一个免疫脾脏
可接种4块96孔板。
⑦将培养板置37℃、5CO2培养箱中培养。
选择杂交瘤细胞及抗体检测
1．HAT选择杂交瘤细胞
脾细胞和骨髓瘤细胞经PEG处理后，形成多种细胞的
混合体，只有脾细胞与骨髓细胞形成的杂交瘤细胞才有意义。在HAT选择培养液中培养时，
由于骨髓瘤细胞缺乏胸苷激酶或次黄嘌呤鸟嘌呤核糖转移酶，故不能生长繁殖，而杂交瘤细
胞具有上述两种酶，在HAT选择培养液可以生长繁殖。
在用HAT选择培养1～2天内，将有大量瘤细胞死亡，3～4天后瘤细胞消失，杂交细
胞形成小集落，HAT选择培养液维持7～10天后应换用HT培养液，再维持2周，改用一般
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f是十分重要的。因为在没有建立一个稳定分泌抗体的细胞系的时候，细胞的培养过程中随时
可能发生细胞的污染、分泌抗体能力的丧失等等。如果没有原始细胞的冻存，则可因上述意
外而前功尽弃。
杂交瘤细胞的冻存方法同其他细胞系的冻存方法一样，原则上细胞应在每支安瓿含
1×106以上，但对原始孔的杂交瘤细胞可以因培养环境不同而改变，在24孔培养板中培养，
当长满孔底时，一孔就可以装一支安瓿冻存。
细胞冻存液：50小牛血清；40不完全培养液；10DMSO（二甲基亚砜）。
冻存液最好预冷，操作动作轻柔、迅速。冻存时从室温可立即降至0℃后放入70℃超
低温冰箱，次日转入液氮中。也可用细胞冻存装置进行冻存。冻存细胞要定期复苏，检查细
胞的活性和分泌抗体的稳定性，在液氮中细胞可保存数年或更长时间。
2．细胞复苏方法将玻璃安瓿自液氮中小心取出，放37℃水浴中，在1mi
内使冻存
的细胞解冻，将细胞用完全培养液洗涤两次，然后移入头天已制备好的饲养层细胞的培养瓶
内，置37℃、5CO2孵箱中培养，当细胞形成集落时，检测抗体活性。
单克隆抗体的大量生产
大量生产单克隆抗体的方法主要有两种：
（1）体外使用旋转培养管大量培养杂交瘤细胞，从一清液中获取单克隆抗体。但此方
法产量低，一般培养液内抗体含量为10～60μgml如果大量生产，费用较高。
（2）体内接种杂交瘤细胞，制备腹水或血清。
①实体瘤法：对数生长期的杂交瘤细胞按1～3×107ml接种于小鼠背部皮下，每处注射
02ml共2～4点。待肿瘤达到一定大小后（一般10～20天）则可采血，从血清中获得单克
隆抗体的含量可达到1～10mgml。但采血量有限。
②腹水的制备：常规是先腹腔注射05mlPrista
e降植烷或液体石蜡于BALBC鼠，1～
2周后腹腔r