单克隆抗体的制备方法
动物的选择与免疫
1．动物的选择纯种BALBC小鼠，较温顺，离窝的活动范围小，体弱，食量及排污较小，一般环境洁净的实验室均能饲养成活。目前开展杂交瘤技术的实验室多选用纯种
BALAC小鼠。2．免疫方案选择合适的免疫方案对于细胞融合杂交的成功，获得高质量的McAb
至关重要。一般在融合前两个月左右根据确立免疫方案开始初次免疫，免疫方案应根据抗原
的特性不同而定。
（1）可溶性抗原免疫原性较弱，一般要加佐剂，半抗原应先制备免疫原，再加佐剂。常用佐剂：福氏完全佐剂、福氏不完全佐剂。
初次免疫抗原1～50μg加福氏完全佐剂皮下多点注射或脾内注射（一般08～1ml02ml点）
↓3周后第二次免疫剂量同上，加福氏不完全佐剂皮下或ip（腹腔内注射）（ip剂量不宜超过05ml）↓3周后第三次免疫剂量同一，不加佐剂，ip（5～7天后采血测其效价）↓2～3周加强免疫，剂量50～500μg为宜，ip或iv（静脉内注射）↓3天后取脾融合
目前，用于可溶性抗原（特别是一些弱抗原）的免疫方案也不断有所更新，如：①将可
溶性抗原颗粒化或固相化，一方面增强了抗原的免疫原性，另一方面可降低抗原的使用量。
②改变抗原注入的途径，基础免疫可直接采用脾内注射。③使用细胞因子作为佐剂，提高机
体的免疫应答水平，增强免疫细胞对抗原的反应性。
（2）颗粒抗原免疫性强，不加佐剂就可获得很好的免疫效果。以细胞性抗原为例，免疫时要求抗原量为1～2×107个细胞。
初次免疫1×10705mlip↓2～3周后第二次免疫1×10705mlip↓3周后加强免疫（融合前三天）1×10705mlip或iv↓
取脾融合
细胞融合
1．细胞融合前准备（1）骨髓瘤细胞系的选择：骨髓瘤细胞应和免疫动物属于同一品系，这样杂交融合率高，也便于接种杂交瘤在同一品系小鼠腹腔内产生大量McAb。常用的骨髓瘤细胞系见表24。表24用于融合试验的主要骨髓瘤细胞系
名称
来源
耐受药物
Ig链HL
sevralgoup
mbthwi±cyxfzP23dqFG
fP3X63Ag8X63
BALBC
骨髓瘤8氮鸟嘌呤
MOPC21
r1K
P3X63Ag8653X63Ag8653P3X63Ag8
8氮鸟嘌呤
－－
P3NSI1Ag41NS1
P3X63Ag8
8氮鸟嘌呤
－K（不分泌型）
P3X63Ag8UlP3Ul
（X63×BALBC细胞）杂交瘤
脾
8氮鸟嘌呤
－－
SP20Ag14SP20
（X63×BALBC细胞）杂交瘤
脾
8氮鸟嘌呤
－－
F0
BALBC骨髓瘤8氮鸟嘌呤
－－
S1945XXOBU1
P3X63Ag8
5溴脱氧尿嘧啶核－－苷
MPC11456TG17
BALBC骨髓瘤6巯鸟嘌呤MPC11
r2bK
210RCY3Ag123
LOU
大鼠骨髓瘤8氮鸟嘌呤
R210
－K
GM15006TGA12
人骨髓瘤Gr