它的一些因素显示了分析检测的灵敏度。最通常的是生物成分(抗体、酶等)的非特异性结合到反应容器和支持物的表面。例如,免疫分析,印迹实验,核酸杂交和其它的酶联结合实验都是受制于此因素。r
管和微孔板r
玻璃、透明或半透明的塑料管、比色皿是化学发光测试比较理想的材料。理想的是光能够通过一个平面然后测试,以减少边际效应。曲面也可以使用,如圆柱型的测试管。用不同的测试管测试比较结果,这些管必须是统一生产的,才可以比较结果。r
微孔板从化学发光反应中发射出的光是各向同性的,即在各个方向上同等发射出来的。如果一个化学反应是在透明的微孔板中的微孔中进行,光不仅从垂直方向发散,还从水平方向发散出来。光很容易的通过各个孔之间的间隙和孔壁。光较强的孔就会干扰相邻的孔。因此,化学发光测试一般不用透明微孔板。r
不透明的微孔板和板条主要有两种-白色和黑色。使用者需要注意的是黑色的因为有光吸收,所以它的信号会比白色板有很明显的减弱(将近10倍)。因为所有的孔是同等比例的收到影响,所以不管他们的强度,定量并没有问题。白色或黑色板的选择,主要是基于预期检测信号的强弱,白色板用于检测较弱光的检测,黑色板用于检测强光的检测。黑色板的另一优点就是可以削弱非特异性结合所带来的问题。r
此外,白色板并不是完全同等不透明。为荧光设计的白板的白色素比用于化学发光的白板的要少的多。在荧光检测时,每检测一次,一般在针对一个孔,消除了相邻孔之间的干扰。白色微孔板的好坏很容易检测,只要在板的后面放上一只灯,然后看每个孔。如果穿过的灯光不仅仅是淡淡的,那么用于较强的化学发光底物的分析是会有一些问题的。r
固相样品的检测r
印迹膜r
X光片--它已经被认为是对固定在膜上的蛋白或核酸进行化学发光检测的强有力的工具,如Souther
、Norther
和Wester
杂交的化学发光检测。此类商业化的产品已非常广泛。r
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如果能够控制好非特异性的结合,灵敏度是足够的。如果不能很好控制,将会X光片上暴光过度。解决这个问题的最好策略是减少结合的试剂的量,例如抗体或类似物。暴光时间1到10分钟通常是足够显现大多数的印迹。更长的很少能提高信号背景。r
关于灵敏度相对的方面来讲,未得到信号并不意味着分析物的不存在。任何一种光学用膜片都有一个强度阈值,在这个阈值之上银颗粒的光化学转化才能成功。否则会失败,称之为“可逆失败”。在实际操作中,化学发光信号低于阈值强度的结果仅是简单的没有记录。更长时间的r