和120的对照品溶液,加入规定量的内标溶液,配成3种不同浓度的溶液,分别至少进样2次,计算平均校正因子,其相对标准偏差应不大于20。
3测定法(1)内标法按各品种正文项下的规定,精密称(量)取对照品和内标物质,分别配成溶液,各精密量取适量,混合配成校正因子测定用的对照溶液。取一定量进样,记录色谱图。测量对照品和内标物质的峰面积或峰高,按下式计算校正因子:
式中
AS为内标物质的峰面积或峰高;AR为对照品的峰面积或峰高;cS为内标物质的浓度;cR为对照品的浓度。
f通则0512高效液相色谱法
(2016年3月26日
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药典四部60页
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再取各品种项下含有内标物质的供试品溶液,进样,记录色谱图,测量供试品中待测成分和内标物质的峰面积或峰高,按下式计算含量:
式中AX为供试品的峰面积或峰高;cX为供试品的浓度;As为内标物质的峰面积或峰高;cS为内标物质的浓度;f为内标法校正因子。采用内标法,可避免因供试品前处理及进样体积误差对测定结果的影响。
(2)外标法按各品种项下的规定,精密称(量)取对照品和供试品,配制成溶液,分别精密取一定量,进样,记录色谱图,测量对照品溶液和供试品溶液中待测物质的峰面积(或峰高),按下式计算含量:
式中各符号意义同上。由于微量注射器不易精确控制进样量,当采用外标法测定时,以手动进样器定量环或自动进样器进样为宜。
f通则0512高效液相色谱法
(3)加校正因子的主成分自身对照法
(2016年3月26日
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测定杂质含量时,可采用加校正因子的主成分自身对照法。在建立方法时,按各品种项下的规定,精密称(量)取待测物质对照品和参比物质对照品各适量,配制待测物校正因子的溶液,进样,记录色谱图,按下式计算待测物的校正因子:校正因子
cAAAcBAB
式中
cA为待测物的浓度;AA为待测物的峰面积或峰高;cB为参比物质的浓度;AB为参比物质的峰面积或峰高。
也可精密称(量)取主成分对照品和杂质对照品各适量,分别配制成不同浓度的溶液,进样,记录色谱图,绘制主成分浓度和杂质浓度对其峰面积的回归曲线,以主成分回归直线斜率与杂质回归直线斜率的比计算校正因子。
校正因子可直接载入各品种项下,用于校正杂质的实测峰面积。需作校正计算的杂质,通常以主成分为参比,采用相对保留时间定位,其数值一并载入各品种项下。
测定杂质含量时,按各品种项下规定的杂质限度,将供试品溶液稀释成与杂质限度相当的溶液,作r