适合一定的肽组学研究;②去血小板的EDTA血浆或枸橼酸血浆样品,更适合分析低分子质量的蛋白质;③如果要使用一定的蛋白酶抑制剂,一定要在早期加入,而且要
谨慎使用,因为抑制剂的加入可能对MS分析造成一定的干扰,而且一些小分子的抑制剂与蛋白质结合转化成蛋白质的亚型,这些都将使得分析结果变得复杂。2、样品的收集与贮存①为减少血小板的污染,血液样品在分析前最好用02μm的低蛋白质结合膜过滤,样品分装冰冻储存,减少融化再冰冻的循环;②样品应分装并贮存在液氮中,减少或不加蛋白酶抑制剂,以减少对测定结果的干扰。3、去除高丰度蛋白和分级技术血浆血清样品中蛋白质种类很多,而且所含蛋白质具有较大的动力学范围,其中有许多丰度较高但不含有特殊生物学信息的蛋白质,这将会对目标蛋白质的分析造成极大的困难,甚至根本不能检测低丰度蛋白质,因此,通过对原始蛋白质进行洗脱和分步分离减少样品中蛋白质的复杂性,可以极大简化蛋白质的预测和分析,提高对低
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丰度蛋白质的检测和识别的灵敏度和准确度。4、多维策略的运用
3、药物蛋白质组学定义及主要研究领域。试举例说明其在药物靶点的发现和确认中的应用(10分)。
药物蛋白质组学就是蛋白质组学技术在药物研发中的应用。药物蛋白质组学的主要研究领域:1临床前研究发现所有可能的药物作用靶点,以及针对这些靶点的全部可能的化合物,以及应用蛋白质组学方法研究药物作用机制和毒理学;2临床研究方面发现药物作用的特异蛋白作为患者选择有效药物的依据和临床诊断的标志物,或以蛋白质谱的差异将患者分类并给予个体化治疗。药物蛋白质组学在药物靶点发现和确认中的应用举例:(1)研究人员通过比较给药前后的蛋白质组,找到了药物阿霉素抗乳腺癌的一个作用靶标Hsp27。(2)疟原虫入侵血红细胞的阻断靶点探测:半胱氨酸蛋白水解酶是疟原虫生存必需的酶,Gree
baum等利用靶向半胱氨酸蛋白水解酶的化学探针I125DCG04打靶,然后通过抗DCG04的生物素纯化,得到了半胱氨酸蛋白水解酶类的亚蛋白质组;通过酶活性分析,最终发现在疟原虫的入侵血红细胞的裂殖期,仅有一个有半胱氨酸蛋白水解酶活性的蛋白质falcipai
1;从数据库筛选到falcipai
1的抑制剂YA29Eps,结果证实YA29Eps可阻断疟原虫的入侵红细胞。
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4、结构蛋白质组学与功能蛋白质组学的研究方法和内容的差异,以及在临床研究和应用上的特点与作用(10分)。5、蛋白质组学在心血管基础和临r