舟之行
一、解释（共15分）1、MALDITOFMS（10分）
基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MatrixAssistedLaserDesorptio
Io
izatio
TimeofFlightMassSpectra），离子源是基质辅助激光解吸电离，质量分析器是飞行时间管。MALDITOFMS是近年来获得快速发展的一种软电离生物质谱，它的建立突破了生物大分子质谱分析的难题，该技术无论在理论上还是在设计上都具有简单、高效、灵敏、快速、准确、测定质量范围大等特点。
基本原理：MALDI是利用一定波长的激光脉冲，在极短的时间间隔内，对含被测样品靶物的一个微小区域提供高能量，从固相直接获得离子的电离方法，其基本特点就是使用了固体基质，特别适用于对热敏感或不挥发化合物的离子化，因此在蛋白质组分析中得到了广泛应用。TOF分析器的离子分离是用非磁方式达到的，离子在离子源中形成后为电场所加速，进入真空无场漂移区，具有不同质荷比的离子因其通过漂移区的时间不同而实现分离，先后到达检测器产生信号。质量较轻的离子飞行速度快较早到达检测器；较重的离子飞行速度慢，较晚到达检测器，且离子的飞行时间与其质荷比的平方根mz12成正比，因此可以通过检测飞行时间来测定离子的质荷比。2、免疫共沉淀（5分）CoImmu
oprecipitatio
（CoIP），是以抗体抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法，是确定两种蛋
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白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。基本原理：当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的许多蛋白质蛋白质间的相互作用被保留下来。如果用蛋白质x的抗体免疫沉淀x，那么与x在体内结合的蛋白质y也能被沉淀下来。该技术可用于鉴定两种目标蛋白质是否在体内结合以及进行结合位点分析，还可用来筛选一种特定蛋白质的新的作用搭档。二、问答题（共85分）1、Wester
Blotti
g的流程（10分）。答1收集蛋白样品Protei
samplepreparatio
2电泳Electrophoresis1SDSPAGE凝胶配制2样品处理3上样与电泳3转膜Tra
sfer4封闭Blocki
g5一抗孵育Primarya
tibodyi
cubatio
6二抗孵育Seco
darya
tibodyi
ucubatio
7蛋白检测Detectio
ofprotei
s8膜的重复利用Membra
erecovery
2、血浆血清蛋白质组研究中需要着重注意的问题（10分）。因血浆血清中的含有各种蛋白质及降解产物，想要获得所需蛋白，需
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选择适合的前处理条件，尤其在进行血浆的肽组学分析时显得更为重要。
1、血浆血清样品选择①去血小板的血浆由于避免血小板的激活作用，减少了蛋白质的
体外降解，因而较血清更r