者曾用此法成功地提取了琥珀酸脱氢酶和碱性磷酸脂酶。丁醇提取法对pH及温度的选择范围较广(Ph3~10)温度由零下2℃~40℃均可。
2.核酸的提取核酸分为两大类:一类为核糖核酸(RNA),另一类为脱氧核糖核酸(DND)。核酸的分子量极大,人数万致亿万。核酸是两性化合物,在一定的等电点。溶于水,其水溶液呈酸性,不溶于乙醇等有机溶剂。细胞内的核酸常和蛋白质结合成核蛋白。核糖核蛋白和脱氧核糖核蛋白在不同浓度的电解质溶液中的溶解度有显著区别,有一定浓度范围的氯化钠溶液中,脱氧核糖核蛋白的溶解度随着氯化钠浓度增加而逐渐下降,当氯化钠浓度为014molL时,其溶解度仅为水中溶解度的1100,但当氯化钠浓度再增加时,脱氧核糖核蛋白的溶解度重新增加,氯化钠浓度增加到05molL时,其溶解度与水中溶解度相似,当氯化钠浓度增加到1molL时,它的溶解度比在水中大2倍。核糖核蛋白在014molL氯化钠溶液中仍有相当大的溶解度,因此常用014molL氯化钠溶液提取核糖核蛋白,而提取脱氧核糖核蛋白时,则用1molL氯化钠溶液。两种核糖核蛋白的溶解度与溶液的pH也有关。当pH为42时,脱氧糖核蛋白的溶解度最低,而pH为20~25时,核糖核蛋白的溶解度最低。所以调节氯化钠溶液的浓度和pH值,可使核糖核蛋白和脱氧核糖核蛋白分离开来。
(1)RNA的提取:RNA在细胞中主要有三种类型,即rRNA(核微粒核糖核酸)、tRNA(转移核糖核酸)和mRNA(信使核糖核酸)。mRNA代谢极不稳定,提取时要求条件较严格;tRNA当细胞破碎后,用酸处理得到“pH5”沉淀,即可从中分离tRNA;rRNA占全部RNA的80以上,比较稳定,一般提取的大分子RNA主要为此部分。核内rRNA常先将细胞核分离后,再进行提取,可避免其他细胞组分RNA的干扰。
RNA的提取,通常是用014molL氯化钠溶液将组织做匀浆并反复提取细胞质中的核糖核蛋白,而留下含有DNA的细胞核物质,然后用10醋酸调至pH42沉淀,离心弃去上清液,先用05molL氯化钠溶液,后用水洗涤沉淀,将核糖核蛋白后溶解于05molL碳酸氢钠溶液中,离心,取上清液,调pH至42沉淀以05molL氯化钠溶液洗涤,再一次除去脱氧核糖核蛋白。核糖核蛋白中的蛋白质可用含有少量辛醇的氯仿抽提除去,核酸留在碳酸氢钠水溶液中,加入乙醇,RNA即以钠盐形式沉淀出来。
提取RNA另一类方法,不须事先用014molL氯化钠提取核糖核蛋白,而一步将RNA的蛋白质分开,并同时把RNA抽提出来,此类方法是在破碎细胞做成匀浆时,加入去污剂十二烷基磺酸钠或二r