失调，以及消化道的通透性增加等症状，而后者是许多肠道失控的主要特征7。所以如何构建耐受胆盐和耐受低pH的酸奶发酵剂，是提高酸奶营养价值被机体吸收利用的关键，成为当前研究的重要方向。
近年来，由于乳酸杆菌具有转化率高、产酸快和基因工程可操作性而广泛用于乳酸发酵生产。尤其是基因组洗牌分子技术，此技术是DNAshuffli
g技术的一个改进，通过改变乳酸菌基因组原有的核苷酸序列，产生新的遗传结构，创造新的基因，并赋予表达产物以新的功能8。
目前国内外也做了很多这方面的研究。微生物原生质体融合技术的整个过程包括：原生质体的制备、原生质体融合、原生质体再生。国内外学者在每一个关键技术上都做了大量的工作，取得了可喜的成就9。并在工业生产中大量应用，尤其是微生物育种方面应用最为广泛。
2研究的主要内容及预期目标
原生质体融合技术是构建多突变组合微生物的有效工具，可以在短时间内获得多亲本的良好的菌株性状耐受胆盐、耐受pH特性、快速产酸特性、细菌素产生、良好的风味的遗传基因的重组菌株，每次原生质体融合都能获得一些有用的遗传多样性，对乳酸菌的育种具有重要意义。
进行原生质体融合时，先用酶脱去两个亲本细胞壁，使菌体细胞在高渗环境中释放原生质体，并在高渗条件下混合，再经聚乙二醇促进，两种原生质体凝集而发生融合，获得异核体或重组子。利用杂合菌可以提高发酵制品的特性或发展新的产品1。
将从酸奶和牛场中分离筛选具有一定的pH和胆盐耐受特性的6株乳酸菌进行原生质体的融合，构建耐受高胆盐浓度和低酸度的优良菌株。
在整个实验中，探讨原生质体制备的最优方案成为一个难点，包括菌株预处理时间，酶解条件等；以及用通过互补致死损伤进行原生质体灭活的方案，作为原生质体融合的标记是一个重点；关于原生质体的融合的再生条件是本实验的关键。必须准确把握每个步骤，达到预期目的。
3研究方案
f31实验流程液体MRS活化菌株、370C过夜培养
原生质体的融合
12Gly液体MRS预处理4h
06Gly05ugml青霉素液体MRS预处理4h
10ugml青霉素MRS预处理4h
原生质体紫外线灭活原生质体高温灭活
2mgml溶菌酶
酶解1020h
再生培养
耐性筛选
32实验材料321实验材料
样品及其来源：从牛奶和牛场环境中筛选出6株具有一定耐胆盐和耐酸乳酸菌菌株PEG6000，溶菌酶322培养基与溶液配制MRS液体培养基：蛋白胨10克，牛肉浸取物10克，酵母提取液5克，葡萄糖5克，乙酸钠5克，柠檬酸二胺2克，吐温801ml，磷r