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用于PCR检测,其制作时最关键的是目的基因的引物设计17。基于芯片的PCR技术主要有两种模式:一种是试剂在温度循环变化的管道区间中连续流动实现PCR扩增,称为连续流动PCR微芯片;另一种是试剂不动,而芯片腔体的温度迅速循环变化实现PCR扩增,称为PCR微池芯片。前一种方式容易实现集成化,后一种方式的反应速度要比前一种快。
根据不同的需要,可将不同的PCR技术与芯片结合,如利用微加工技术制备的微型PCR芯片5、实时定量PCR芯片9、荧光定量PCR芯片17等。
f32固相PCR所谓固相PCR,就是将特定引物寡核苷酸通过不同的方法共价固定到固相支持物上来
扩增目标DNA。固相支持物有琼脂糖小珠、乳胶小珠、聚丙烯酰胺小珠、普通玻片、磁珠、硅片等。在固相支持物上固定核酸的方法有两种,1)将核酸的末端修饰上氨基,比如利用氨基与甲苯磺酰基或肼基的反应来固定核酸;2)将核酸的末端磷酸化修饰,再通过磷酸基团与其他功能基团结合将核酸固定在固相支持物表面。容易分离纯化PCR产物是固相PCR的主要优点。例如用琼脂糖小珠固定引物与RTPCR相结合就能很方便地构建cDNA文库12。
图2桥式固相PCR原理(摘自陶生策等2001)
33电子PCR电子PCRElectro
icPCRePCR是一种新概念,主要是用于基因组作图12。现在已
经成为常用的核苷酸序列电子分析工具,它在DNA片段的染色体定位、基因组测序、基因组辅助作图、PCR引物辅助设计和基因克隆等方面都发挥着重要的作用20。
电子PCR技术是利用生物信息学数据库作为平台,借助相应的分析运算软件,搜索要查询的DNA序列queryseque
ce是否含有序列标记位点Seque
ceTaggedSitSTS,并且根据序列标记位点(STS)在已知基因组图谱的位置将所查询的DNA序列在基因组图谱上进行定位21。它的原理与BLAST相似,但是BLAST是将所查询序列与数据库中序列的全长进行比对,而电子PCR是将所查询序列与数据库中STS序列两端的PCR引物序列进行比对。从一定意义上说,电子PCR是一种不需要具体实验操作的,并且借助于某些生物信
f息数据和专用分析软件在计算机上进行的PCR技术,而BLAST是类似于电子杂交技术。34简并PCR
简并PCR是于20世纪90年代初建立起来的用于细胞遗传学中特异扩增DNA的技术,它根据密码子存在的简并性设计寡核苷酸引物,并进行聚合酶链式反应,由于该PCR反应不需要知道要扩增DNA片段的核苷酸序列,所以该技术在很多领域都得到广泛的应用。
PCR最初是为了扩增已知序列设计的,简并PCR技术能扩增未知的序列。当r
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