足生长液后，置37℃培养。待细胞贴壁（约4h）后，换培养液一次。③或取出细胞悬液至离心管中，补加10ml培养液，5001000rmi
低速离心5mi
，去上清，
f用培养液适当稀释后装入培养瓶中，置37℃培养，次日后更换一次培养液。④待细胞长成单层后即可传代。第五章1细胞融合：定义：指用自然或人工方法、使两个或更多个不同的细胞融合成一个细胞的过程，又称为体细胞杂交。2细胞融合的方法：PEG介导的融合、细胞电融合、病毒介导的融合3特异性杂交瘤细胞的筛选原理：通过选择性培养后生长的杂交瘤细胞，仅有部分是分泌预定特异性抗体的杂交瘤细胞。可取上清液，根据抗原的性质、抗体类型及所需灵敏度等具体情况来加以选择。4单抗的制备：1）过程动物免疫与亲本细胞的选择、2）细胞融合：淋巴细胞杂交瘤的制备、3）杂交瘤细胞的筛选：有限稀释法等4）单克隆抗体的制备和冻存5）单克隆抗体的纯化抗体制备有两种方法增量培养法小鼠腹腔接种法5杂交瘤技术的原理及流程：用抗原免疫小鼠免疫牌细胞、骨髓瘤细胞的培养骨髓瘤细胞在PEG作用下融合成杂交瘤细胞选择培养基（HAT培养基）；未融合的的细胞死亡，杂交瘤细胞存活阳性克隆的筛选及克隆化克隆扩增及大量制备McAb6杂交瘤技术产生的3个技术关键：1）B淋巴细胞与骨髓瘤细胞的特性2）细胞融合技术3）杂交瘤细胞的筛选7单抗纯化方法盐析凝胶过滤离子交换层析亲和层析法辛酸沉淀法第六章1胚胎工程（embryoe
gi
eeri
g）以生殖细胞和胚胎细胞为对象进行的操作，利用人工方法影响、改变动物胚胎品质发育和进程的一种生物技术。主要技术包括体外受精、胚胎切割、胚胎移植等。2精子获能：精子离开精巢后，无使卵受精的能力，它必须经过在附睾中成熟及在雌性生殖道内停留一段时间，才具有使卵受精的能力，这种现象称精子获能。3顶体反应定义：精子在同卵子表面接触或与卵膜分泌的物质相遇后，精子的顶体就会发生一系列的变化。4体外受精（IVF）：就是将哺乳动物卵母细胞从母体取出，在体外进行精卵结合的过程。5胚胎移植（embryotra
sfer，ET）一般是针对早期胚胎而言，它是指附植前的早期胚胎很容易由子宫中取出，经过人为处理，可以再送入子宫的过程，这是胚胎生物工程的基本技术。6同期发情：胚胎移植时，供体胚胎必须与受体子宫内膜发育状态高度同步化，才能获得好效果，这个过程称为同期发情7多精受精的阻止：透明带反应、受精膜的形成8胚胎r