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、电镜检测、培养检测
f7污染后解决方法::使用抗生素、加温处理、使用支原体特异性血清、其他方法第四章1接触抑制定义:细胞从接种到长满底物表面后,由于细胞繁殖数量增多相互接触后,不再增加。2密度抑制:细胞接触汇合成片后,虽发生接触抑制,但只要营养充分,细胞仍然能够进行增殖分裂,数量仍在增多,但当细胞密度进一步增大时,培养液中营养成分的减少,细胞营养的枯竭和代谢物的影响,则发生密度抑制,导致细胞分裂停止细胞永生化也称不死性,是细胞获得持续生长增殖能力的特性。而恶性细胞不仅能长期增殖生长并有异体接种致瘤性。3细胞系(cellli
e)是指由原代培养经初步纯化,获得的以一种细胞为主的、能在体外长期生存的不均一的细胞群体。
4细胞株(cellstrai
)是指细胞系经进一步的克隆化,得到的由单一细胞组成的群体。细胞系(cellli
e)是指由原代培养经初步纯化,获得的以一种细胞为主的、能在体外长期生存的不均一的细胞群体。
5细胞培养的常用液体水新鲜制备的纯水或三蒸水平衡盐溶液Ha
k’s、PBS液等维持渗透压平衡消化液胰蛋白酶、EDTANa及胶原酶溶液、消化酶抑制液含血清培养液、大豆胰酶抑制剂pH调整液NaHCO3、HEPES溶液抗生素液青霉素、链霉素、卡那霉素和庆大霉素等谷氨酰胺补充液谷氨酰胺溶液,注意其很不稳定6传代细胞培养方法1)贴壁生长的细胞:消化法传代、直接吹打或用硅胶软刮2)悬浮细胞:直接吹打、自然沉降法细胞的冻存原则:慢速冷冻、保存温度低细胞的复苏原则快速解冻7细胞同步化培养方法:1)选择细胞同步化:M期细胞震摇脱落法、离心洗脱法、梯度沉降法2)诱导细胞同步化法:血清饥饿法(G1)、异亮氨酸营养缺乏法(G1)、DNA合成抑制剂阻断法(S)、秋水仙素阻断法(M)8细胞的冻存要点:①消化细胞(同前),将细胞悬液收集至离心管中。②1000rpm离心10分钟,弃上清液。③沉淀加含保护液的培养,计数,调整至5×106ml左右。④将悬液分至冻存管中,每管1ml。⑤将冻存管口封严。如用安瓿瓶则火焰封口,封口一定要严,否则复苏时易出现爆裂。⑥贴上标签,写明细胞种类,冻存日期。冻存管外拴一金属重物和一细绳。⑦按下列顺序降温:室温→4℃(20分钟)→冰箱冷冻室(30分钟)→低温冰箱(-30℃1小时)→气态氮(30分钟)→液氮。9.细胞的复苏要点①将冻存于液氮中的冻存管取出,迅速放入3740℃水浴中使其在1mi
内融化。②无菌操作下打开冻存管,将细胞悬液吸取到培养瓶中,补r
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