一、实验目的
35二硝基水杨酸法测定还原糖
掌握还原糖的测定原理，学习用比色法测定还原糖的方法
二、实验原理
35二硝基水杨酸溶液与还原糖（各种单糖和麦芽糖）溶液共热后被还原成棕红色的氨基化合物，在一定范围内，还原糖的量和棕红色物质的颜色深浅的程度成一定比例
关系。在540
m波长下测定棕红色物质的吸光度，查标准曲线，便可求出样品中还原糖的含量。
三、材料、仪器设备和试剂
材料：食用面粉
仪器设备：刻度试管，漏斗，烧杯，容量瓶
试剂：1mgmL葡萄糖标准液35二硝基水杨酸试剂：63g35－二硝基水杨酸溶于262ml2molL的氢氧化钠
溶液中。将此溶液与500ml含有182g酒石酸钾钠的热水混合。向该溶液中再加入5g重蒸酚和5g亚硫酸钠，充分搅拌使之溶解，待溶液冷却后，用水稀释到1000ml。储存于棕色瓶中。
四、实验步骤
1制作葡萄糖标准曲线取7支具有25ml刻度试管，编号，按下表所示的量精确加入浓度为1mgml的葡萄糖标准液和35二硝基水杨酸试剂。
项目
管号
0
1
2
3
4
5
6
葡萄糖标准液mL
002040608
10
12
蒸馏水mL
2018161412
10
08
35二硝基水杨酸试剂mL1515
15
15
15
15
15
相当于葡萄糖量mg
002040608
10
12
将各管摇匀，在沸水浴中加热5mi
取出后立即放入盛有冷水的烧杯中冷却至室温，在以蒸馏水定容至25ml刻度处，颠倒混匀。在540
m波长下，用0号管调零，分别读取16号管的吸光度。以吸光度为纵坐标，葡萄糖毫克数为横坐标，绘制标准曲线，求得回归方程。2样品还原糖的测定21样品中还原糖的提取
准确3g食用面粉，放在100ml的烧杯中，先以少量蒸馏水调成糊状，然后加50ml蒸馏水，摇匀，置于50°C恒温水浴中保温20mi
使还原糖浸出。离心，用20ml蒸馏水洗残渣，再离心，将两次离心的上清液全部收集在100ml的容量瓶中个，用蒸馏水定容至刻度，混匀，作为还原糖待测液。22显色和比色
取三支25ml刻度试管，编号，分别加入还原糖待测液2ml35二硝基水杨酸试剂15ml其余操作均与制作标准曲线相同，测定各管的吸光度。
五、结果计算分别在标准曲线上查出相应的还原糖毫克数，按下式计算还原糖的百分含量：
还原糖
由回归方程求得的还原糖的量样品1000
提取液的体积显色时取用体积100
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