学的发展,人们已有可能通过抗体工程技术制备人鼠嵌合抗体、人源化抗体或全人抗体。
f2人鼠嵌合抗体
嵌合抗体指的是鼠mAbs的恒定区基因被人Abs的恒定区基因通过基因重组技术所替换而编码产生的单克隆抗体45。这样既能保持鼠单抗的特性,又使获得的单抗降低了在人体内的免疫反应。Jo
es6等在20世纪80年代中期首次成功构建了小鼠抗半抗原4羟基3硝基苯乙酰基己酸NP的免疫球蛋白VH基因,并最终获得可特异结合NP的人源化嵌合抗体,再通过定点突变法进行单纯的CDR移植构建,形成第一代人源化抗体。随后还相继研发了阿昔单抗(抗GPIIbIIIa鼠人嵌合抗体)、美罗华Rituximab、CetuximabC225,Erbitux、Zevali
和Bexxa等嵌合抗体,现均已被广泛应用于科学研究与疾病诊断之中。
CDR移植抗体,又称改型抗体,它是在嵌合抗体的基础上,利用基因工程技术,进一步用人的FR代替鼠FR,形成的只剩3个鼠源CDR的、更为完全的人源化抗体。由于具有支持作用的FR不仅为CDR的构想提供了环境,还参与抗体结合位点正确构像的形成和抗原的结合,常常使得CDR移植抗体的亲和力和特异性大大降低,有的甚至还丧失了抗原结合能力7。通过大量研究,我们发现选用与鼠源单抗具有高度同源性的人源抗体,但保留鼠源单抗中的一些关键氨基酸残基,并在此基础上,对鼠CDR和FR的一些表面氨基酸残基进行修饰或重塑,对关键氨基酸残基进行一定的改变,能在保留CDR移植抗体的亲和力和特异性下,大大降低其免疫原性。因此,相对于嵌合抗体,第二代人源化抗体CDR移植抗体的人源化程度能达到70以上,有利于其在临床试验中的应用与研究。
f3完全人源性抗体
为了能使单克隆抗体大量的应用于疾病治疗、临床试验和科研中,我们不仅要降低其免疫原性,还要对其亲和力质量、治疗能力强弱等方面提更高的要求。目前,研究人员已建立多种方法生产完全人源性抗体,主要有噬菌体展示技术和转基因小鼠技术。
31噬菌体展示技术
1985年,SmithGP8将外源基因通过基因工程技术插入丝状噬菌体基因组中,从而在噬菌体表面以融合蛋白的形式展示,这一技术即为噬菌体展示技术。该技术把基因表达产物与亲和筛选结合起来,可以利用适当的靶蛋白将目的蛋白或多肽挑选出来,从而得到全套的噬菌体库。近年来该技术在众多基础和应用研究领域如免疫学、细胞生物学、药物开发中产生的影响已日渐明显。噬菌体展示首先是通过大肠杆菌特异性的噬菌体发展起来。迄今为止,已建立的噬菌体展示系统,如:丝状噬菌体、l噬r