流式细胞仪上机操作培训手册
一、样本处理
以PBMC表面抗原的流式检测步骤为例1取样。取新鲜提取或冻存后复苏的PBMC；2编号。根据实验设计，标记好流式管，如每份PBMC设两管：a1号管：相应同型对照；b2号管：CD3CD4CD8CD56四标管；3加样。用移液器取100ul细胞管（约1×106个细胞管），分别加到已经标记好的流式管底部；4洗涤。加入1mlPBS管，涡旋1600rpmmi
，离心6mi
；5染色。弃上清，加入100μlPBS管涡旋混匀细胞，并根据实验设计，向各流式管中加入相应的荧光素标记抗体，混匀，室温避光孵育30mi
（操作尽量保持在避光条件下进行。）6洗涤。加入1mlPBS管，涡旋1600rpmmi
，离心6mi
；7重悬。弃上清，加入05mlPBS管，混匀，上机检测可选择BDFACSCa
toII或BDAccuriC6。（注：若不能及时上机，应加入4多聚甲醛固定，并于4℃避光保存。）8）试验结果分析。（注：实验过程中如果进行多色标记，需要调节荧光补偿）。参考值：CD3CD8608754182328CD4NK（CD3CD56）29445895235
f二、上机检测BDFACSCa
toII简要操作流程
启动流式细胞仪
1打开流式细胞仪电源2启动计算机，打开软件登录3确保软件连接到流式细胞仪
必要时，点击Cytometerco
ect
检查液体水平
1启动流式细胞仪后，检查液体水平低液面水平或者废液桶满都用红色指示。
f2如果液流车未自动开启，选择CytometerFluidicsStartup。3当液流启动完成后，点击OK关闭对话框。
检查气泡
1在检查完液体水平后，开启流动室门，检查流动室中是否有气泡。
2如果没有看到气泡，进行第5步。如果看到气泡，点击Cytometer
Clea
i
g
fModesDegasFlowCell3当完成信息出现后，点击OK。4如果还可以看到气泡，重复上述操作。注意：如果打开流动室细胞进口门时出现错误信息，通过关闭进口门，并等待30秒关闭该信息。5当您完成上述操作后，在往下进行之前请先检查激光预热是否已经完成。
创建实验
1按照需要，在工作区工具栏中点击相应的按钮来显示浏览器、细胞仪、检测器、工作表、获取控制板和双指数编辑器窗口。2创建文件夹：A在浏览器中选择数据库图标，并点击浏览器工具栏上的NewFolder。B对该文件夹命名。
f3选择该文件夹，点击NewExperrime
t来创建一个新实验。4对该实验进行重命名。5选择实验级别的细胞仪设置，然后点击I
spector检测器中的Parameters参数选项卡。
6按照需要变更，添加或者删除参数。
运行样本并记录数据
1将样品管安装到流式细胞仪中并点击AquireData获取数据。Ar