实验四、血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳
目的：熟悉醋纤薄膜电泳方法及其在分离血清蛋白中的应用，了解电泳技术的一般原理。
原理：1、电泳：带电质点在电场中移动的现象称为电泳。影响电泳泳动速度的因素：《生化实验》p51内因：带电性质及电量，质点大小，质点形状外因：电场强度，溶液pH值，溶液离子强度，电渗现象等任何一个物质的质点，由于其本身在溶液中的解离或由于其表面对其它带电质点的吸附，会在电场中向一定的电极移动。例如，氨基酸、蛋白质、酶、激素、核酸及其衍生物等物之都具有许多可解离的酸性和碱性基团，它们在溶液中会解离而带电。一般来说，在碱性溶液中（即溶液的pH值大于等电点pI；本实验的pH值为86，pI不一样，样品带电荷也就不一样；选取不合适的pH，会使样品带有不同的正或负电荷，影响电泳），分子带负电荷，在电场中向正极移动。而在酸性溶液中，分子带正电荷，在电场中向负极移动。移动的速度取决于带电的多少和分子的大小。不同的质点在同一电场中泳动速度不同，常用泳动度（或迁移率）来表示。泳动度的定义是带电质点在单位电场强度下的泳动速度。即：p53《生化实验》泳动度首先取决于带电质点的性质，即质点所带静电荷的量、质点的大小和质点的形状。一般来说，质点所带静电荷越多，质点直径越小，越接近于球形，则在电场中泳动速度越快；反之，则越慢。泳动度除受质点本身性质的影响外，还受其它外界因素的影响，如溶液的粘度等。影响泳动速度的主要外界因素有下列几种：p5356一）电场强度二）溶液的pH值pH值距等电点越远，质点所带静电荷越多，泳动速度也越快；反之，则越慢。因此分离某一混合蛋白质样品时，应选择一个合适的pH值，使各种蛋白质所带静电荷的量差异较大，以利于分离。为使电泳过程中溶液的pH恒定，必须采用缓冲液。三）溶液的离子强度越高，泳动速度越慢，一般最适离子强度在00202之间。为了保持电泳过程中待分离生物大分子的电荷以及缓冲液pH值的稳定性，缓冲液通常要保持一定的离子强度，一般在002－02，离子强度过低，则缓冲能力差，但如
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f果离子强度过高，会在待分离分子周围形成较强的带相反电荷的离子扩散层（即离子氛），由于离子氛与待分离分子的移动方向相反，它们之间产生了静电引力，因而引起电泳速度降低。另外缓冲液的粘度也会对电泳速度产生影响。
四）电渗现象液体在电场中对于一个固体支持物的相对移动，称为电渗现象（图）。如，纸电泳，纸上带负电荷r