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,与纸接触的水溶液因为静电感应带有正电荷,在电场的作用下溶液向负极移动并带动质点向负极移动。电泳时,质点移动的表面速度是质点移动速度和由于溶液移动而产生的电渗速度的加和。若质点原来向负极移动,则表面速度比电泳速度快;若质点原来向正极移动,则其表面速度比电泳速度慢。因此,电泳时应尽量避免使用具有高渗作用的支持物。
由于支持介质表面可能会存在一些带电基团,如滤纸表面通常有一些羧基,琼脂可能会含有一些硫酸基,而玻璃表面通常有SiOH基团等等。这些基团电离后会使支持介质表面带电,吸附一些带相反电荷的离子,在电场的作用下向电极方向移动,形成介质表面溶液的流动,这种现象就是电渗。在pH值高于3时,玻璃表面带负电,吸附溶液中的正电离子,引起玻璃表面附近溶液层带正电,在电场的作用下,向负极迁移,带动电极液产生向负极的电渗流。如果电渗方向与待分离分子电泳方向相同,则加快电泳速度;如果相反,则降低电泳速度。
2、醋酸纤维薄膜电泳是用醋酸纤维薄膜作为支持物的电泳方法。醋酸纤维素是纤维素的羟基乙酰化所形成的纤维素醋酸酯。将它溶于有机溶剂(如丙酮、氯仿、氯乙烯、乙酸乙酯等)后,涂抹成均匀的薄膜(有薄膜的是膜面,无光泽,无膜的是光洁面),干燥后就成为醋酸纤维薄膜。醋酸纤维薄膜具有泡沫状的结构(三维立体结构),厚度约120um,有很强的通透性,对分子移动阻力很小,对样品的吸附作用小(有的材料对样品会有很强的吸附作用)。醋酸纤维薄膜的优点:具有微量、快速、简便及分辨率较高等优点,广泛应用于血清蛋白、血红蛋白、脂蛋白、同工酶的分离和测定。蛋白质是兼性离子。由于组成蛋白质分子的氨基酸种类和数目不同,各种血清蛋白质的分子量和等电点也不相同。在同一条件下电场强度、电渗、温度、缓冲液pH和离子强度等,它们电泳速度各不相同,因而可以分离。本实验以醋酸纤维薄膜为支持物,利用血清蛋白分子的大小、形状以及在同一pH下所带电荷的差异(各种蛋白质由于氨基酸组分、立体构象、相对分子质量、等电点及形状不同,在电场中迁移速度不同。血清中蛋白质颗粒的等电点大部分低于7,在缓冲液pH86中带负电荷,在电场中向正极
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f移动)将导致它们在电场中的移动速度不同,从而使得它们在膜上能够分离开,染色后呈现出电泳图谱。电泳后根据血清蛋白移动快慢,可依次分为清蛋白、球蛋白的α1、α2、β、γ五个区带,染色后显出清晰色带。由于在一定范围内,各色带蛋白质含r
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