脂质体转染的实验原理与操作步骤大全
细胞转染的方法主要包括：电穿孔法、显微注射、基因枪、磷酸钙共沉淀法、脂质体转染法、多种阳离子物质介导、病毒介导的转染等，理想的细胞转染方法是具有高转染效率、对细胞的毒性作用小等，本文主要介绍细胞转染常用的方法脂质体转染的原理和操作步骤等。
脂质体lipofecti
regea
t，LR试剂是阳离子脂质体N12，3Dioleyoxy，Propyl
，
，
Trimethylammo
iumChlorideDOTMA和Dioleoylphotidyetha
olami
eDOPE的混合物1：1ww。它适用于把DNA转染入悬浮或贴壁培养细胞中，是目前条件下最方便的转染方法之一。转染率高，优于磷酸钙法，比它高5100倍，能把DNA和RNA转染到各种细胞。
用LR进行转染时，首先需优化转染条件，应找出该批LR对转染某一特定细胞适合的用量、作用时间等，对每批LR都要做：第一，先要固定一个DNA的量和DNALR混合物与细胞相互作用的时间，DNA可从15μg和孵育时间6小时开始，按这两个参数绘出相应LR需用量的曲线，再选用LR和DNA两者最佳的剂量，确定出转染时间224小时。因LR对细胞有一定的毒性，转染时间以不超过24小时为宜。
细胞种类：COS7、BHK、NIH3T3、Hela和Jurkat等任何一种细胞均可作为受体细胞。
一、脂质体liposome转染方法原理脂质体liposome转染方法原理：脂质体Iiposome作为体内和体外输送载体的工具，已经研究的十分广泛，用合成的阳离子脂类包裹DNA，同样可以通过融合而进人细胞。使用脂质体将DNA带人不同类型的真核细胞，与其它方法相比，有较高的效率和较好的重复性。中性脂质体是利用脂质膜包裹DNA，借助脂质膜将DNA导入细胞膜内。带正电的阳离子脂质体，DNA并没有预先包埋在脂质体中，而是带负电的DNA自动结合到带正电的脂质体上，形成DNA阳离子脂质体复合物，从而吸附到带负电的细胞膜表面，经过内吞被导入细胞。二、脂质体转染操作步骤
1、操作步骤方法一：
1细胞培养：取6孔培养板或用35mm培养皿，向每孔中加入2mL含12×105个细胞培养液，37℃CO2培养至4060汇合时汇合过分，转染后不利筛选细胞。
2转染液制备：在聚苯乙稀管中制备以下两液为转染每一个孔细胞所用的量A液：用不含血清培养基稀释110μgDNA，终量100μL，B液：用不含血清培养基稀释250μgLR，终量100μL，轻轻混合A、B液，室温中置1015分钟，稍后会出现微浊现象，但并不妨碍转染如出现沉淀可能因LR或DNA浓度过高所致，应酌情减量。
3转染准备：用2mL不含血清培养液漂洗两次，再加入1mL不含血清培养液。
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