p38α丝裂原活化蛋白激酶在食管鳞癌细胞Eca109中的功能研究
郑树涛刘涛刘清鲁芒高向朋伊力亚尔夏合丁林仁勇卢晓梅
【期刊名称】《中华预防医学杂志》【年卷期】2013047008【摘要】目的探讨p38α丝裂原活化蛋白激酶MAPK在食管鳞癌细胞Eca109中的可能作用方法构建p38α特异性的shRNA干扰载体瞬时转染Eca109细胞运用qRTPCR、免疫印迹分别检测p38α干扰后在mRNA、蛋白水平上的沉默效果；运用MTT和流式细胞仪检测p38α干扰后Eca109细胞增殖细胞周期和凋亡的变化；运用细胞划痕实验检测p38α干扰后细胞迁移能力的改变作为平行反向验证转染含有p38α全长cDNA的真核过表达质粒运用免疫印迹检测p38α过表达后在蛋白水平上的表达效果；运用MTT和流式细胞仪检测p38α过表达后细胞增殖细胞周期和凋亡的变化；运用细胞划痕实验检测p38α的变化后细胞迁移能力的改变结果p38α基因在受干扰后测定其蛋白水平表达水平22970±2857较空质粒组35658±2286降低差异具有统计学意义t4475P＜001观察Eca109细胞的增殖变化发现干扰48h后吸光度值0951±0086大于对照组细胞0811±0012t320P＜005表明Eca109细胞增殖加快观察细胞周期和凋亡变化发现干扰48h后凋亡率17400±5495较空质粒组1000±0721增加t4006P＜001；干扰72h后细胞迁移速度0034±0031较空质粒组0278±0021加快t579P＜001表明浸润能力增加p38α在过表达后检测到其内源性p38α蛋白表达水平41170±2357高于对照组35658±2286t441P0005；48h过表
f达组吸光值0472±0089与对照组细胞吸光值0811±0012相比细胞增殖受到抑制t750P＜001细胞生长活动在G1期受阻t480P＜001并且其细胞凋亡32233±1457高于空质粒组1000±0721t1720P＜001细胞迁移0770±0054mm较空质粒组0278±0021mm减慢并且浸润受到抑制t1100P＜001结论p38dMARK抑制食管鳞癌细胞Eca109的发生发展过程ObjectiveToi
vestigatetheroleofp38αmitoge
activatedpotei
ki
asesMAPKi
huma
esophagealsquamouscellcarci
omacellli
eEca109MethodsSpecificshorthairpi
shRNAvectoraswellaseukaryoticexpressio
vectorharbouri
gfullle
gthcDNAofhuma
p38αMAPKweretra
sfectedi
toEca109cellsCellproliferatio
aftertra
sfectio
wasdetectedbyMTTcellcyclea
dapoptosiswereassayedbyflowcytometryThevariatio
ofmigratio
a
di
vasio
aftertra
fectio
wasdetermi
edusi
gwou
dheali
gassaya
dTra
swellassayrespectivelyResultsTheproliferatio
ofEca109cellsafterk
ockdow
for48h0951±0086wassig
ifica
tlyi
creasedt320P＜005comparedwithco
trol08r