DNA提取和PCR
课题1DNA的粗提取与鉴定
一、基础知识
（一）提取DNA的方法
提取生物大分子的基本思路是选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理或化学性质
的生物大分子。对于DNA的粗提取而言，就是要利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和
化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。
（1）DNA的溶解性：

DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，利用这一特点，选择
适当的盐浓度就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反，以达到分离目的。

此外，DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精。利用这一原理，可
以将DNA与蛋白质进一步的分离。
（2）DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性：蛋白酶能水解蛋白质，但是对DNA没有影响。大多数蛋白质不能忍受6080oC的高温，
而DNA在80℃以上才会变性。洗涤剂能够瓦解细胞膜，但对DNA没有影响。
（二）DNA的鉴定
在沸水裕条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色，因此二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。
二、实验设计
（一）实验材料的选取
凡是含有DNA的生物材料都可以考虑，但是使用DNA含量相对较高的生物组织，成功的
可能性更大。
（二）破碎细胞，获取含DNA的滤液
动物细胞的破碎比较容易，以鸡血细胞为例，在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水，同
时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可。如果实验材料是植物细胞，需要先用洗涤剂溶解细
胞膜。例如，提取洋葱的DNA时，在切碎的洋葱中加入一定的洗涤剂和食盐，进行充分的搅
拌和研磨，过滤后收集研磨液。注意：不能用哺乳动物的成熟红细胞提取DNA。
（三）去除滤液中的杂质
方案一利用DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度的不同，通过控制NaCl溶液的浓度
去除杂质。
方案二直接在滤液中加入嫩肉粉，反应10～15mi
，嫩肉粉中的木瓜蛋白酶能够分解
蛋白质。
方案三将滤液放在60～75℃的恒温水浴箱保温10～15mi
，注意严格控制温度范围。
（四）DNA的析出与鉴定
1、将处理后的溶液过滤，加入与滤液体积相等的、冷却的酒精溶液（体积分数为95），静
置2～3mi
，溶液中会出现白色丝状物，这就是粗提取的DNA。用玻璃棒沿一个方向搅拌，
卷起丝状物，并用滤纸吸取上面的水分。
2、取两支20ml的试管，各加入物质的量浓度为2molL的NaCl溶液5ml，将丝状物放入其
中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解。然后，向两支试管中各加入4ml的二苯
胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热5mi
，待试管冷却后，比较两支试管溶
液颜色的变r