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、丙烯酰胺和N,N’亚甲双丙烯酰胺,应以温热以利于溶解双丙稀酰胺的去离子水配制含有29wv丙稀酰胺和1wvN,N’亚甲双丙烯酰胺储存液丙稀酰胺29g,N,N亚甲叉双丙稀酰胺1g,加H2O至100ml。储于棕色瓶,4℃避光保存。严格核实PH不得超过70,因可以发生脱氨基反应是光催化或碱催化的。使用期不得超过两个月,隔几个月须重新配制。如有沉淀,可以过滤。2、十二烷基硫酸钠SDS溶液10wv01gSDS,1mlH2O去离子水配制,室温保存。3、分离胶缓冲液15mmolLTrisHCLpH881815gTris和48ml1molLHCL混合,加水稀释到100ml终体积。过滤后4°C保存。4、浓缩胶缓冲液05mmolLTrisHCLpH68605gTris溶于40mlH2O中,用约48ml1molLHCL调至pH68加水稀释到100ml终体积。过滤后4°C保存。这两种缓冲液必须使用Tris碱制备,再用HCL调节PH值,而不用TrisCL。5、TEMED原溶液四甲基乙二胺催化过硫酸铵形成自由基而加速两种丙稀酰胺的聚合。PH太低时,聚合反应受到抑制。AP提供两种丙稀酰胺聚合所必须的自由基。去离子水配制数ml,临用前配制610过硫酸铵溶液:称取1g过硫酸铵,加超纯水溶解并定容至10ml,分装到15ml微量离心管中,冻存。7、SDSPAGE加样缓冲液在沸水终煮3mi
混匀后再上样,一般为2025ul,总蛋白量100μg。8、Tris甘氨酸电泳缓冲液303gTris,188g甘氨酸,10gSDS,用蒸馏水溶解至1000ml,临用前稀释10倍。PH839、转移缓冲液:29g甘氨酸、58gTris碱、037gSDS(可不加),200ml甲醇(临用前加),加水至总量1L。10、丽春红染液储存液:丽春红S2g三氯乙酸30g磺基水杨酸30g加水至100ml用时上述储存液稀释10倍即成丽春红S使用液。使用后应予以废弃。11、脱脂奶粉5wv。12、NaN3002叠氮钠有毒,戴手套操作,溶于磷酸缓冲盐溶液PBS。42422聚丙烯酰胺凝胶溶液:分离胶125PH885ml10ml15ml超纯水15ml30ml45ml30丙烯酰胺溶液21ml42ml64mlpH88、15molLTris溶液13ml26ml38ml10SDS005ml01ml015mlTEMED0002ml0004ml0006ml10过硫酸铵005ml01ml015ml
浓缩胶:5,pH682ml4ml6ml超纯水14ml28ml41ml30丙烯酰胺溶液03ml06ml10mlpH68、10molLTris溶液025ml05ml075ml10SDS002ml004ml006mlTEMED0002ml0004ml0006ml10过硫酸铵002ml004ml006ml
一.配胶1.注意一定要将玻璃板洗净,最后用ddH2O冲洗,将与胶接触的一面向下倾斜置于干净的纸
f巾晾干。2.分离胶及浓缩胶均可事先配好(除AP及TEMED外),过滤后作为储存液避光存放于4℃,可至少存放1个月,临用前取出室温平r
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