用氯气消毒水源等
紫外线消毒：30W紫外灯照射30mi
灼烧灭菌：酒精灯火焰使用强烈的理化因素杀死物体内干热灭菌：160℃～l70℃外所有的微生物包括芽孢和孢下灭菌1～2h子高压蒸汽灭菌：121℃100kPa条件下，灭菌15～30mi

接种室空气接种工具的灭菌玻璃器皿、金属工具的灭菌
灭菌
培养基及容器的灭菌
4．制备牛肉膏蛋白胨固体培养基操作分析
1培养基需冷却至50℃时开始倒平板①原因：琼脂是一种多糖，在98℃以上熔化，在44℃以下凝固，倒平板时高于50℃则会烫手，低于50℃时若不能及时操作，琼脂就会凝固。②估计培养基温度的方法是：培养基从灭菌锅中取出冷却一段时间后用手触摸，感觉上以刚不烫手为准。2平板倒置原因：平板皿盖上会凝结水珠，培养基表面的温度也较高，平板倒置后，既可使培养基表面的水分更好地挥发，又可防止肛盖上的水珠落入培养基，造成污染。
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f5．纯化大肠杆菌操作过程中的注意事项微生物的接种方法中最常用的是稀释涂布平板法和平板划线法
（1）稀释涂布平板法稀释涂布平板的操作比较复杂，且各个细节均需保证“无菌”．应特别注意：①酒精灯与培养皿的距离要合适。②吸管头不要接触任何其他物体。③吸管要在酒精灯火焰周围使用。（2）平板划线法操作步骤：①操作第一步即取菌种之前及每次划线之前接种环都需要进行火焰灼烧灭菌，划线操作结束时，仍需灼烧接种环，每次灼烧目的如下表：
第一次操作
杀死接种环上原有的微生物
每次划线之前
划线结束
杀死上次划线后接种环上残留的菌种，杀死接种环上残存的菌种，避使下次划线的菌种直接来源于上次划免细菌污染环境和感染操作线的末端，使每次划线菌种数目减少者
目的
②从第二次以后的划线操作总是从上一次划线末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐渐减少，最终得到由单个细菌繁殖而来的菌落。
2微生物的纯化培养的两种方法：平板划线法和稀释涂布平板法
1平板划线法在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环，在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环。在灼烧接种环之后，要等其冷却后再进行划线，以免接种环温度太高，杀死菌种。由于划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。2稀释涂布平板法涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。每一个稀释度下涂布三个平板作为重复组，不同稀释度下涂布的r