光通道(FL1FL4)一般用对数(Log)。
(6)调出细胞计数器:Acquire
Cou
ter
4上阴性对照将阴性对照管混匀,上机,功能键设置在“RUN”散点图出现细胞信号,第一个图:让细胞信号出现在自己看上去舒服的区域;其他三个散点图,要将细胞信号调整到阴性区域,即左下角区域。通过移动通
f道电压来实现。
获取实验数据:暂停刚才实验Pause
Abort
Acquire注意:在获取细胞之前,要将Setup前面的勾子取消。
5上单阳管,调节功能键“RUN”如果细胞信号出现在双阳区域,说明
有细胞信号露到相邻通道中,要将细胞信号调节到单一通道中。通过
移动通道补偿来实现,想要细胞信号向哪个通道移动,就用散点图中
的另一个通道去减,即想要移动的那个通道作为减数。如在FL1和
FL2两个通道组成的散点图中,细胞信号出现在双阳区域,要将细胞
信号移动到FL1通道,就要调节FL2FL1对应的补偿,直到细胞信号
只出现在FL1通道中,这样可以消除漏到FL2通道中的信号。
备注:FL1FITC,FL2PE,FL3PerCP,FL4APC。
根据实验要求选择流速,按设置顺序上样。
6点击“Acquire”命令,仪器开始获取数据,并自动将数据文件保存
到规定的目录下。
7样本获取完毕,功能键设置在“STANDBY”,并选择“脱机”命令。
8点击“Quit”命令,退出CellQuest软件。
9关机:(1)1次氯酸,高速(Hi)“RUN”510mi
,Acquire如果
细胞计算器中不显示有细胞则表示管道已经干净。
(2)用双蒸水高速(Hi)“RUN”510mi
,Sta
dby5mi
,关
机。
四、DNA倍性分析实验:一、仪器情况检测,DNA倍性分析的质控用CellQuestPro软件进行。
1(1)保证机器预热5mi
,打开CellQuestPro软件,选择“联机”。
Acquire
Co
ecttoCytometer
做质控时,需要画三个图,第一个是散点图,横坐标是FSC,纵坐标是SSC;第二
个是散点图,横坐标是FL2Width,纵坐标是FL2Area;第三个是直方图,横坐标是FL2Area,
纵坐标是Cou
ter。做DNA倍性实验时一般使用PI染色,所以选择用第二通道(FL2)。DNA
倍性分析不需要调节补偿。因为属于单色实验,所以把电压界面Fourcolor掉。将信号接收方式“Log”改为“Li
”,DDMPram改为“FL2”。
前的勾去阈值使用
FL2,而不是FSC。
去掉细胞群中粘连体,上样本,利用第二个图,调节FL2A和FL2W电压,使细
f胞群信号显示在横纵坐标200位置,通常血细胞中单细胞成45℃,粘连体体积会比单细胞大,大概在横坐标400位置。保存质控。
二、DNA倍性分析用ModFitLT软件进行。(1)打开ModFitLT软件,调出样品检测结果,(2)选择面积r