一、开机程序:
1检查鞘液桶和废液桶。确认鞘液充满状态(鞘液为鞘液桶体积的34位
置,可以连续工作3个小时左右)、盖紧黑盖、管道畅通、废液桶有足
够空间容纳本批标本排弃的废液。如果要添加鞘液,要先释放鞘液桶中
气压。
2依次打开流式细胞仪FACSCalibur稳压器、主机开关、电脑开关,打印
机。
3气压阀置于加压位置,待流式细胞仪处于STANDBY状态,做Prime,以
排除管路中气泡。
二、运行FACSComp软件、检查仪器状况
1制备三色标准微球样本。一般情况向1ml鞘液(或过滤PBS)中加入
1滴质控小微球,也可以根据实际情况调节浓度。
2机器预热5mi
,打开FACSComp软件,选择保持路径。选择所需校
正内容,如果使用的微球是新一批产品要输入微球的批号。
3在软件界面左侧AssaySelectio
选项中选择质控类型,即实验过
程中是否需要清洗样品。
4上样品,微球溶液上样之前要充分混匀。功能键设置在“RUN”。
5仪器自动检查,并做电压、补偿等设置。
6FACSComp软件运行完毕,显示结果通过测试。
7做Setup。
8打印校正结果,退出FACSComp程序。
备注:在质控过程中,如果提示收集细胞速度慢可以提高细胞收集速度,但是在
调节灵敏度(Se
s)时,一定要用“Low”的状态上样,保证仪器灵敏度的准确。
在使用仪器过程中要养成好的习惯,在上样品过程中,仪器保持在“Low”“Sta
dby”
状态。
三、样品分析软件:CellQuestPro
1保证机器预热5mi
,打开CellQuestPro软件,选择“联机”。
Acquire
Co
ecttoCytometer
(1)在弹出的界面中的选择数据存储路径(Directory菜单);
f(2)对实验样本进行命名;
(3)对实验通道进行预设(FSCSSCFL1FL4)。
备注:如果界面被关闭,重新调出步骤:
Wi
dows
ShowBrowers
2调出质控模板。
Cytometer
I
strume
tSetti
gs
Ope
BD图标
BDFiles
I
strume
tSetti
gs
选择调用的质控文件
Ope
Set(一定要做)
Do
e
3画图
选择画图工具(一般选择散点图),I
spect界面会自动弹出,对几
个常用选项进行设定:将散点图选中(用鼠标点击散点图边框才能够
选中图形),将A
alysis改为AcquireA
alysis更改横纵坐
标表示名称,设置十字象限。如果要做四色实验,则绘制四个图。
备注:第一个散点图横坐标为FSC,纵坐标为SSC。
(1)设定获取细胞数目:Acquire个细胞。
Acquisitio
一般获取10000
(2)调出电压、阈值和补偿等界面。从工具栏Cytometer选项中调出(123和4)(3)将所有补偿调为0。Compleme
t(4)将非52的阈值调为0。
Threahold
(5)FSC和SSC一般用线性(Li
)激r