一、开机程序：
1检查鞘液桶和废液桶。确认鞘液充满状态（鞘液为鞘液桶体积的34位
置，可以连续工作3个小时左右）、盖紧黑盖、管道畅通、废液桶有足
够空间容纳本批标本排弃的废液。如果要添加鞘液，要先释放鞘液桶中
气压。
2依次打开流式细胞仪FACSCalibur稳压器、主机开关、电脑开关，打印
机。
3气压阀置于加压位置，待流式细胞仪处于STANDBY状态，做Prime，以
排除管路中气泡。
二、运行FACSComp软件、检查仪器状况
1制备三色标准微球样本。一般情况向1ml鞘液（或过滤PBS）中加入
1滴质控小微球，也可以根据实际情况调节浓度。
2机器预热5mi
，打开FACSComp软件，选择保持路径。选择所需校
正内容，如果使用的微球是新一批产品要输入微球的批号。
3在软件界面左侧AssaySelectio
选项中选择质控类型，即实验过
程中是否需要清洗样品。
4上样品，微球溶液上样之前要充分混匀。功能键设置在“RUN”。
5仪器自动检查，并做电压、补偿等设置。
6FACSComp软件运行完毕，显示结果通过测试。
7做Setup。
8打印校正结果，退出FACSComp程序。
备注：在质控过程中，如果提示收集细胞速度慢可以提高细胞收集速度，但是在
调节灵敏度（Se
s）时，一定要用“Low”的状态上样，保证仪器灵敏度的准确。
在使用仪器过程中要养成好的习惯，在上样品过程中，仪器保持在“Low”“Sta
dby”
状态。
三、样品分析软件：CellQuestPro
1保证机器预热5mi
，打开CellQuestPro软件，选择“联机”。
Acquire
Co
ecttoCytometer
（1）在弹出的界面中的选择数据存储路径（Directory菜单）；
f（2）对实验样本进行命名；
（3）对实验通道进行预设（FSCSSCFL1FL4）。
备注：如果界面被关闭，重新调出步骤：
Wi
dows
ShowBrowers
2调出质控模板。
Cytometer
I
strume
tSetti
gs
Ope

BD图标
BDFiles
I
strume
tSetti
gs
选择调用的质控文件
Ope

Set（一定要做）
Do
e
3画图
选择画图工具（一般选择散点图），I
spect界面会自动弹出，对几
个常用选项进行设定：将散点图选中（用鼠标点击散点图边框才能够
选中图形），将A
alysis改为AcquireA
alysis更改横纵坐
标表示名称，设置十字象限。如果要做四色实验，则绘制四个图。
备注：第一个散点图横坐标为FSC，纵坐标为SSC。
（1）设定获取细胞数目：Acquire个细胞。
Acquisitio

一般获取10000
（2）调出电压、阈值和补偿等界面。从工具栏Cytometer选项中调出（123和4）（3）将所有补偿调为0。Compleme
t（4）将非52的阈值调为0。
Threahold
（5）FSC和SSC一般用线性（Li
）激r