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0%时所需赶黄草提取液浓度,计算出赶黄草提取液中溶质质量,按公式计算IC50值。溶质质量所需浓度越
f低,表明半清除率越高。IC5050%×消耗的DPPH质量/加入的试样溶液中溶质的质量3结果DPPH吸收光谱与测定波长的确定DPPH在溶液中具有典型紫红色,当它与能提供1个电子的自由基清除剂作用时,生成浅色产物,使溶液的典型紫红色变浅。测定DPPH溶液在200~600
m之间的光谱,由图1可知,DPPH溶液在醇水体系中其327
m和517
m处吸光度都具有极大值,但517
m处的极大值在加入槲皮素后降低较显着,故选用在95乙醇体系下517
m处DPPH含量的变化来进行测定。DPPH溶液稳定性实验测定DPPH在95乙醇中吸光度变化与时间的关系,结果显示DPPH的吸光度在40mi
内基本不变。加入样品后,测定吸光度与时间的关系,发现吸光度随时间增长呈线性降低,但30mi
后,吸光度的变化已经很小。结果见2。为了提高测试准确度,在加入样品反应20mi
后,迅速测定吸光度。
f抗氧化剂浓度与其清除DPPH的关系抗坏血酸、没食子酸和槲皮素是常见的抗氧化剂[6],配制槲皮素、抗坏血酸、没食子酸标准溶液,逐级稀释使用。按“”方法测定,图3可见抗氧化剂浓度在一定范围内,随着浓度的增高,清除DPPH自由基的能力逐渐增大。各抗氧化剂浓度与清除率之间线性方程分别表示如下,槲皮素:Y6×103C7,R29;没食子酸:Y1×103C4,R20;抗坏血酸:Y6×103C4,R25。可见,在一定范围里,可以用清除率来表示抗氧化剂SPPH自由基的清除能力。从图3曲线可知,采用清除率极大值点或其他特征点所对应的抗氧化剂含量来比较DPPH自由基清除能力的方法比较合理。由于极值点测定比较困难,误差较大,而自由基清除率在50时对应的点较容易在曲线上标定,因此选定抗氧化剂的自由基半清除率IC50值为测定指标。采用该法测定的槲皮素、抗坏血酸、没食子酸的IC50为,,。结果见图4。
f不同提取方法清除DPPH自由基的能力按“”,“”,“”不同方法提取,使用相同溶剂得到提取物,逐级稀释,按“”方法测定,结果见图5。不同提取方法得到的提取物都具有一定的清除自由基的能力,在一定浓度范围内,呈现正向变化,但随着浓度增加到一定值后,清除率趋于平缓。回流提取得到的提取物的IC50为,超声提取得到的提取物的IC50为,温浸提取得到的提取物的IC50为,回流提取得到的提取物的IC50最高。不同溶剂提取物清除DPPH自由基的能力按“”回流提取法分别用95乙醇,水,丙酮提取r
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