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的仪器,
f一般实验室难以。DPPH分析法是一种筛选自由基清除剂,评价抗氧化活性的简便方法[5]。当有自由基清除剂存在时,由于其与DPPH中电子配对使DPPH液吸收逐渐消失,DPPH液褪色程度与配对电子数成化学计量关系,因而可用分光光度法进行定量分析。为了了解赶黄草的抗氧化性质,进而阐明其所具有的抗病毒保肝作用机制,本文对赶黄草提取物清除DPPH自由基的活性进行了研究。1仪器与试剂双光束紫外可见分光光度计TU1901北京普析通用仪器有限公司,电子天平梅特勒托利多仪器有限公司,旋转蒸发仪上海亚荣生化仪器有限公司,电热恒温鼓风干燥箱北京市永光明医疗仪器厂,超声清洗仪昆明市超声仪器有限公司,数显恒温水浴锅江苏省荣华仪器制造有限公司。二苯基苦味酰基苯肼DPPH,购自sigma公司。供试药材赶黄草200710下旬采自湖南浏阳,由湖南中医药大学周日宝教授鉴定为虎
f耳草科植物赶黄草Pe
thorumchi
e
sePursh。2方法赶黄草有效成分的提取回流提取法准确称取药材g,加入10倍量的溶剂,回流提取2h,重复两次,将提取液过滤,滤液真空浓缩至浸膏,干燥待用。超声提取法准确称取药材g,加入10倍量的溶剂,加热超声2h,重复两次,将提取液过滤,滤液真空浓缩至浸膏,干燥待用。温浸法准确称取药材g,加入10倍量的溶剂,温浸2h,重复两次,将提取液过滤,滤液真空浓缩至浸膏,干燥待用。不同极性溶剂萃取法准确称取药材g,以“”方法用75乙醇提取两次,提取液经真空浓缩至小体积,依次用石油醚、醋酸乙酯和正丁醇萃取,所得各萃取部分浓缩成浸膏,干燥待用。赶黄草提取物清除DPPH自由基能力的测定
f清除率的测定精密称取mgDPPH于50ml容量瓶中,用95乙醇溶解;样品溶解于95乙醇溶液中。取样品溶液1ml加入到离心管,再加入3ml的DPPH溶液配成样品溶液。95乙醇溶液1ml加入到离心管,再加入DPPH溶液3ml配成未加样品液的DPPH溶液。取样品溶液1ml加入到离心管,再加入3ml的95乙醇配成样品空白溶液。上述溶液在室温下离心20mi
后用紫外分光光度计在517
m下检测。测定样品溶液吸光度Ai,未加样品液的DPPH溶液吸光度Ac,样品空白溶液吸光度Aj。根据下列公式计算清除率清除率[1-/Ac]×100半清除率的测定抗氧化剂清除自由基能力采用清除DPPH的半清除率表示。将待测液配制成不同浓度溶液,测定DPPH自由基清除率,并绘制DPPH自由基清除率对待测液浓度曲线,由曲线读取或用方程计算出DPPH自由基清除率为5r
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