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用合适的方法对抗抗体进行筛选,就可得到具有已知酶活性的抗体酶。酶→第一次免疫小鼠→获得抗酶的抗体→第二次免疫小鼠单克隆化→抗体酶。采用拷贝法Ler
er等根据金属肽酶的研究成果,以磷酸酯为碳酸酯的过渡态类似物,合成了一个含有吡啶甲酸的磷酸酯化合物作为半抗原,得到一株单克隆抗体6D4,用来催化不含吡啶甲酸的相应的碳酸酯水解反应,使反应加速近1000倍。Schultz小组认为对硝基苯磷酰胆碱是相应羧酸二酯水解反应的过渡态类似物,用此类似物作半抗原诱导产生单克隆抗体,经过筛选,找到一株MOPC167,它使该水解反应速度加快12000倍。研究的结果表明,这些抗体酶具有酶的一般特性,其催化动力学行为满足米氏方程,并具有底物特异性及PH依赖性等酶反应的特征。
f拷贝法的优点是对于某些来源紧张的酶来说可以用生产单克隆抗体的方法大量生产相应的抗体酶;缺点是这类抗体酶需要通过大量的筛选才可获得,具有一定的盲目性。32引入法利用基因工程、蛋白质工程方法将催化基因引入到已有底物结合能力的抗体的抗原结合位点上,也可制备出催化抗体。具体的方法是通过人工合成出能表达催化抗体的基因,然后将编码的基因转入细菌或酵母菌的表达系统,采用定点突变技术将特定的氨基酸残基引入抗原结合部位,使其获得催化功能,经筛选纯化后制备出催化酶。也可以采用选择性化学修饰的方法将人工合成或者是天然存在的催化基因引入到抗体的抗原结合部位。将抗体的结合部位引入催化基团是增加催化效率的关键,引入功能基因的方法一般有两种:①利用部位选择性试剂,用类似亲和标记的方法定向地将催化基团引入抗体。②用DNA重组技术和蛋白质工程技术改变抗体的亲和性和专一性,引入酸、碱催化基团或亲核体,使用这类方法的另一关键在于要事先对抗体的结构有所了解,确定过程化抗体的目标。亲和标记是将催化基团引入到抗体结合部位的有效方法。一般先用可裂解亲和试剂与抗体作用,然后再用二硫苏糖醇(DTT)处理,则在抗体结合部位附近引入巯基,用此巯基作为锚可以很方便地引入其它化学功能基,如咪唑等。已用此法制备了含有活性部位巯基和咪唑基的具有水解活力的抗体酶。特别重要的是此法不需要了解反应的过渡态及反应的详细机理,而且可以引入天然和非天然的辅因子。蛋白质工程即定点突变是产生抗体酶的另一个重要方法,用此方法可以精确地将催化基因引入到抗体的结合部位上。Schultz小组用此方法将催化基因组氨酸插入到对r
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