为特异性阳性染色。4一般标本在高压灯下照射超过3mi
，就有荧光减弱现象，经荧光染色的标本最好在当天观察，随着时间的延长，荧光强度会逐渐下降。二间接免疫荧光法测抗原基本原理染色程序分为两步，第一步，用已知未标记的抗体（待检标本）加到已知抗原（待检标本）标本上，在湿盒中37℃保温30mi
，使抗原抗体充分结合，然后洗涤，除去未结合的抗体。第二步，加上荧光标记的抗球蛋白抗体或抗Igg、Igm抗体（通常为荧光标记的对应二抗）。如果第一步发生了抗原抗体反应，标记的荧光标记的二抗就会和已结合抗原的抗体进一步结合，从而可鉴定被检测抗原。试剂与仪器磷酸盐缓冲盐水（pbs）：001molL，ph74缓冲甘油：分析纯无荧光的甘油9份ph9202m碳酸盐缓冲液1份配制。荧光标记的抗人球蛋白抗体：以001molL，ph74的
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fpbs进行稀释。搪瓷桶三只（内有001molL，ph74的pbs1500ml）有盖搪瓷盒一只（内铺一层浸湿的纱布垫）荧光显微镜玻片架滤纸37℃温箱等。实验步骤1滴加001molL，ph74的pbs于未知抗原标本片，
10mi
后弃去，使标本片保持一定湿度。2滴加以001molL，ph74的pbs适当稀释抗体，覆
盖未知抗原标本片。将玻片置于有盖搪瓷盒内，37℃保温30mi
。
3取出玻片，置于玻片架上，先用001molL，ph74的pbs冲洗12次，然后按顺序过001molL，ph74的pbs三缸浸泡，每缸5mi
，不时振荡。
4取出玻片，用滤纸吸去多余水分，但不使标本干燥，滴加一滴一定稀释度的荧光标记二
抗5将玻片平放在有盖搪瓷盒内，37℃保温30mi
。6重复操作3。7取出玻片，用滤纸吸去多余水分，滴加一滴缓冲甘油，
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f再覆以盖玻片。8荧光显微镜高倍视野下观察，结果判定同直接法。注意事项1荧光染色后一般在1h内完成观察，或于4℃保存4h，
时间过长，会使荧光减弱。2每次试验时，需设置以下两种对照：（1）阴性对照：阴性血清荧光标记物（需有使用人员
自行建立标准）（2）荧光标记物对照：pbs荧光标记物如果标本自发荧光对照和特异性对照呈无荧光或弱荧
光，待检标本呈强荧光，则为特异性阳性染色。3未知抗原标本片需在操作的各个步骤中，始终保持湿
润，避免干燥。4所滴加的抗体或荧光标记物，应始终保持在未知抗原
标本片上，避免因放置不平使液体流失，从而造成非特异性荧光染色。storagestoreat
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