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免疫荧光技术服务
篇一：常用免疫荧光标记技术及原理常用免疫荧光标记技术及原理篇二：免疫荧光技术操作步骤免疫荧光技术操作步骤一直接免疫荧光法测抗原基本原理将荧光素标记在相应的抗体上，直接与相应抗原反应。其优点是方法简便、特异性高，非特异性荧光染色少，相对使用标记抗体用量偏大。试剂与仪器磷酸盐缓冲盐水（pbs）：001molL，ph74荧光标记的抗体溶液：以001molL，ph74的pbs进行稀释缓冲甘油：分析纯无荧光的甘油9份ph9202m碳酸盐缓冲液1份配制搪瓷桶三只（内有001molL，ph74的pbs1500ml）
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f有盖搪瓷盒一只（内铺一层浸湿的纱布垫）荧光显微镜玻片架滤纸37℃温箱等。实验步骤1滴加001molL，ph74的pbs于待检标本片上，10mi
后弃去，使标本保持一定湿度。2滴加适当稀释的荧光标记的抗体溶液，使其完全覆盖标本，置于有盖搪瓷盒内，保温一30mi
定时间（参考：30mi
）。3取出玻片，置玻片架上，先用001molL，ph74的pbs冲洗后，再按顺序过001molL，ph74的pbs三缸浸泡，每缸35mi
，不时振荡。4取出玻片，用滤纸吸去多余水分，但不使标本干燥，加一滴缓冲甘油，以盖玻片覆盖。5立即用荧光显微镜观察。观察标本的特异性荧光强度，一般可用“”表示：（）无荧光；（±）极弱的可疑荧光；（）荧光较弱，但清楚可见；（）荧光明亮；（）荧光闪亮。待检标本特异性荧光染色强度达“”以上，而各种对照显示
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f为（±）或（），即可判定为阳性。注意事项1对荧光标记的抗体的稀释，要保证抗体的蛋白有一定
的浓度，一般稀释在1：20100之间，要自行摸索最佳梯度，建立最好的稀释比例，抗体
浓度过低，会导致产生的荧光过弱，影响结果的观察。2染色的温度和时间需要根据各种不同的标本及抗原
而变化，染色时间可以从10mi
到数小时，一般30mi
已足够。染色温度多采用室温（25℃
左右），高于37℃可加强染色效果，但对不耐热的抗原（如流行性乙型脑炎病毒）可采用02℃的低温，延长染色时间。低温染
色过夜较37℃30mi
效果好的多。3为了保证荧光染色的正确性，首次试验时需设置下述对照，以排除某些非特异性荧光染色的干扰。（1）标本自发荧光对照：标本加12滴001molL，ph74的pbs。（2）特异性对照（抑制试验）：标本加未标记的特异性抗体，再加荧光标记的特异性抗
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f体。如果标本自发荧光对照和特异性对照呈无荧光或弱荧光，待检标本呈强荧光，则r