了监控PCR实验的污染情况，应该同时设立阴性对照，重复试验，甚至对PCR产物进行测序分析，以鉴定扩增片段的正确性。2．假阴性假阴性在PCR反应过程中也较容易出现，常见原因主要有一下几个方面：标本处理不当造成靶DNA的丢失、降解，或者存在抑制PCR反应的杂质；PCR反应体系中TaqDNA聚合酶失活、Mg2浓度过低或者没有添加；引物设计不合理、存在二级结构；PCR循环退火温度过高或者PCR仪显示温度与实际运行温PCR产物在鉴定的过程中没有加入溴化乙啶或电泳时间过长等，PCR在度不符；反应中设立阳性对照，一旦发现假阴性结果，从上述几个方面分析原因。3．引物二聚体产生引物二聚体的原因有：两条相同的引物或者不同引物分子之间存在较多的碱基配对，特别是引物3′端有互补区域；PCR反应体系中引物与模板比例过高；PCR反应过程中退火温度设定过低或循环次数过多。4．非特异性PCR扩增常见的造成非特异性PCR扩增的原因及相应预防措施如下：引物特异性不高或用量过多；TaqDNA聚合酶质量不好或者用量偏高；Mg2浓度过高；退火温度过低，退火以及延伸时间过长；循环次数过多。除此之外，选择特征性强的序列来进行引物设计，使用纯度较高的引物、酶、Mg2、模板DNA都是有效的方法，必要时还可以使用提高特异性的添加剂。5、PCR污染及预防措施潜在的污染源包括待检者、操作人员身体表面，实验室的一切试剂、器材及仪器或其它与扩增产物接触的任何东西都可能成为潜在的污染源。1）预防措施：①分开操作区域。在专用超净工作台进行样品制备，专设工作台进行PCR操作，PCR产物在另一工作台进行结果分析；所有工作区域应经常使用紫外
f线消毒。②耐高压的试剂及器材应高压灭菌，但酶、引物、dNTP、加样器等不能高压灭菌，以免试剂失活或器材损坏。③使用一次性Tip头、Eppe
dorf管等。④小量分装所有试剂。⑤样品制备应按无菌操作原则进行，避免样品间相互污染。⑥操作者带手套操作，且应勤换手套。⑦用于PCR的加样器绝不能用于PCR产物分析。⑧使用尿嘧啶DNA糖基化酶控制PCR产物交叉污染。这是近年来新发展起来的避免污染的较好的方法。其原理是：PCR反应系统中以dUTP取代在dTTP，使扩增产物中含有尿嘧啶。在以后的PCR扩增前用尿嘧啶DNA糖基化酶（UDG）处理，UDG切割污染DNA上的尿嘧啶，DNA断裂，TaqDNA聚合酶不可能再扩增污染的DNA片段，UDG对天然的核酸模而板无影响。然后加热去除UDG活性，再做PCR，即可防止PCR产物污染。⑨每次PCR操作都应设阳性r