融化，然后分别移出30微升
介导液（Reage
tC）和15微升染色液（Reage
tB）到新的15毫升离心管，标记为染色工作液，并放在暗室里备用。然后进行下列操作。
二、荧光酶标仪检测
1．准备1个黑色96孔细胞培养板，标记为：细胞样品孔、空白对照孔（不含细胞）、最大对照孔（不含细胞）
2．小心抽去细胞样品孔的培养液3．加入100微升清理液（Reage
tA）到细胞样品孔里4．加入100微升饱和液（Reage
tD）到最大对照孔里5．加入100微升阴性液（Reage
tE）到空白对照孔里6．分别加入10微升染色工作液到所有孔里7．轻轻摇动酶标板，混匀8．室温下（22℃），孵育30分钟，避免光照9．放进37℃细胞培养箱里孵育30分钟，避免光照10．小心抽去细胞样品孔里的上清液11．小心加入100微升清理液（Reage
tA）到细胞样品孔里12．重复实验步骤12和13一次13．放进37℃细胞培养箱里孵育30分钟14．即刻放进荧光酶标仪测读：获得相对荧光单位（relativefluoresce
ceu
it；RFU）15．计算样品线粒体钙离子浓度
【（样品RFU－空白对照孔RFU）÷（最大对照孔RFU－样品RFU）】X570（纳摩尔；解离常数）
三、（共聚焦）或荧光显微镜检测
1．准备1个待测的细胞爬片样品2．小心加上500微升清理液（Reage
tA），覆盖样品表面3．小心移去样品上的清理液（Reage
tA）4．移取300微升清理液（Reage
tA）到新的15毫升离心管5．加入30微升染色工作液，混匀6．小心加上上述染色工作液到样品上，覆盖样品表面7．室温下（22℃），孵育30分钟，避免光照8．放进37℃细胞培养箱里孵育30分钟，避免光照9．小心移去样品上的染色工作液
f10．小心加上500微升新鲜的清理液（Reage
tA）11．小心移去清理液（Reage
tA）12．小心加上500微升新鲜的清理液（Reage
tA）13．放进37℃细胞培养箱里孵育30分钟14．小心移去清理液（Reage
tA）15．盖上盖玻片16．即刻在（共聚焦）荧光显微镜下进行观察：激发波长550
m，散发波长590
m（线粒体钙离子呈现红
色）
注意事项
1．本产品为20次（显微镜）或60次（96孔板）操作2．操作时，须戴手套3．避免使用EDTA等处理样品4．孵育反应完成后即刻进行荧光测定5．如果待测样品浓度过高或过低，可以调整样品浓度6．检测敏感度可达纳摩尔级钙浓度范围7．可以使用荧光分光光度仪检测8．本公司提供系列钙生化检测试剂产品
质量标准
1．本产品经鉴定性能稳定2．本产品经鉴定检测敏感
fr