保存）。2阴性对照、阳性对照直接取出50μl，加入50μl核酸提取液，混匀后100℃水浴或干浴10mi
。12000rpm离心10mi
，备用。14ul×1100ul×1100ul×12试剂配制【试剂准备区】从试剂盒中取出UU反应混合液，在室温下融化并振荡混匀后，2000rpm离心10sec。计算需准备反应试剂人份数
样本数2管对照品。每人份反应体系配制如下：试用剂量UU反应混合液356μlTaq酶04μl
05Trito
100、5Chelex100含TrisHClpH8910mmolL、KCl50mmolL、MgCl2
18ml×1
UU反应混合液
4mmolL、dTTP、dATP、dGTP、dCTP各100umolL、引物A100
molL、引物B100
molL、探针75
molL、BSA200ugml
Taq酶UU阳性对照阴性对照
含TaqDNA酶及抗体主要成份为UU基因组DNA重组克隆主要成份为09NaCL
注不同批号试剂盒中各组份不可以互换
【储存条件及有效期】
试剂20℃可保存12个月，未使用完的试剂继续冷冻保存不影响其稳定性，但试剂反复冻融不得超过三次。
计算上述各试剂的使用量，加入一适当体积的离心管中，充分混匀后，按36μl量分装到PCR反应管中，转移至样本处理区。3加样【样本处理区】1
【适用仪器】
f分别加入4μl的阴性对照、UU阳性对照、样品处理上清液，盖紧反应管，转移至检测区。4PCR扩增及荧光检测【PCR检测区】将各反应管按一定顺序放入PCR仪上，按以下程序进行PCR扩增：步12骤循环数140温度时间
9
实验中用过的吸头请直接打入盛有1的次氯酸钠的废物缸内，并与其他废弃物品一同灭菌后丢弃。
10工作台及各种实验用品应定期用1的次氯酸钠、75酒精或紫外灯进行消毒。11PCR反应混合液应避光低温保存。12不同批号的试剂请勿混用，并请在有效期范围内使用。
95℃94℃60℃
3mi
15sec30sec
【参考文献】
1《体外诊断试剂说明书编写指导原则》2《临床实验室定量测定室内质量控制指南》3《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》45Realtimequa
titativePCRGe
omeRes6986994Ki
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gofDNAamplificatio
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BioTech
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Biotech
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检测荧光选择：请选择FAM荧光检测。
【检验结果的解释】
阈值设定原则以阈值线刚好超过正常阴性对照品的最高点阳性对照Ct值应小于38阴性对照Ct无数值；在阈值以上的荧光曲线应当是具有明显的S型曲线，否则该次实验视为无效应检查仪器、试剂、扩增条件等方面的误差1检测样本Ct值≤370者判为阳性2检测样本Ct值370的样本建议重做重做结果Ct值r