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产碱性纤维素酶真菌的筛选鉴定及酶学性质研究
作者：曾青兰来源：《湖北农业科学》2008年第08期
摘要经过初筛和复筛从从碱性土样中分离出的7株产纤维素酶的真菌中获得1株能够产碱性纤维素酶的丝状真菌t42。经18SrRNA基因序列分析和，确定该菌株为镰刀霉菌Fusariumsp。酶学性质初步研究显示t42的CMC酶最适作用pH值为75，在pH值7085的范围内具较高的稳定性反应温度以50℃左右为宜，且在55℃以下具有较高的温度稳定性Mg2M
2和Z
2对酶反应有促进作用，Pb2和Cu2对酶反应有抑制作用。
关键词碱性纤维素酶真菌筛选鉴定酶学性质
中图分类号文献标识码A文章编号04398114200808089902
纤维素酶是由多种水解酶组成的一个复杂酶系，主要来自于真菌和细菌。碱性纤维素酶在碱性条件下具有内切β1，4葡萄糖苷酶活力，因而在洗涤剂纺织废水处理和制浆造纸工业等行业中有更好的应用前景13。但目前研究较多的是木霉Trichoderma曲霉Aspergillus属等真菌产生的酸性纤维素酶。酸性纤维素酶在碱性条件下酶活性较低或根本没有活性稳定性较差pH值适应范围窄等，这极大限制了纤维素酶在这些行业中的应用。因此筛选产酶性能好的产碱性纤维素酶的菌株有较大的实际意义和应用价值。
1材料与方法
11材料
碱性土壤朽木取自湖北咸宁天化纺业有限公司附近。羧甲基纤维素钠培养基CMCNa培养
基4NaCl6g，MgSO47H2O01g，KH2PO405g，CaCl201g，K2HPO420g，CMCNa15g，NH42SO420g，蒸馏水1000mL，pH值885固体培养基加15琼脂。分离培养基PDA培养基马铃薯200g，蔗糖20g，琼脂15g，蒸馏水1000mL。
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12方法
121菌株的筛选
1固体培养初筛将采集到的碱性土壤朽木等经无菌水洗涤后，吸取上清液作一系列梯度稀释，将稀释液涂布在选择培养基羧甲基纤维素钠CMCNa平板上用前加入适量抗生素来抑制细菌生长，28℃倒置恒温培养分离筛选生长旺盛，并在刚果红染色NaCl脱色后可以观察到菌落周围有明显透明水解圈的菌株进行下一步研究5。
2摇瓶复筛将筛选到的菌种由平板接到50mL250mL三角瓶液体培养基中，于28℃210rmi
1下培养24h，制成种子液。然后按5的接种量将种子液加到50mL250mL三角瓶相应液体培养基中，于28℃210rmi
1条件下培养48h，将发酵的粗酶液在不同pH条件下测定酶活，选择酶活反应的最适pH偏碱性的菌株保藏备用。
122纤维素酶活力的测定取15mL005molL1醋酸缓冲液配制的10r