4多聚甲醛配置：
（4是指4g多聚甲醛固体溶于00mLPBS中）1先配好PBS2称取4g多聚甲醛固体3将多聚甲醛放入PBS中水浴锅65℃加热3h注意：1先配现用，多聚甲醛容易挥发。上午使用，前一天下午配置；下午使用，当天上午配置。2多聚甲醛有毒，使用时要在通风橱中进行并配戴口罩
40g多聚甲醛固体→1LPBS120g多聚甲醛固体→3LPBS药品PBSNaClKClNa2HPO412H2OKH2PO4加三次水，1L定容取50只小鼠，1只小鼠注射20mL4的多聚甲醛溶液，共需1000mL≈，故要配置1、5L的4的多聚甲醛溶液用量1L8g02g288g02g
从组织中提取总蛋白
组织匀浆
8mL裂解液8mLRIPA80LPMSF（100×）1905Lcocktail（100×）1mLRIPA10LPMSF（100×）238Lcocktail（100×）
1裂解：取少量组织600L裂解液匀浆→4℃振荡裂解45mi
→4℃离心12000rmi
，离心15mi
2稀释：取3L上清27L无菌水→BCA试剂盒以A液：B液50：1的比例混合→样品25L混合液200L（设置三组平行对照）温敷：37℃下温敷30mi
→570
m下检测OD10左右→测蛋白浓度，
f计算50g70g对应体积和buffer体积→5×buffer，最大上样量
÷4buffer体积
3变性：100℃煮沸10mi
，80℃保存
组织总RNA提取
取小鼠肝组织50100mg加人1mLTrizolTM试剂置于碾钵中快速研磨样品体积不超过TrizolTM的10。匀浆后的样本于室温孵育5mi
使核蛋白复合物完全融解再加人02mL氯仿盖好样本管盖用手剧烈振荡15s后室温静置3mi
；4℃下12000rmi
离心15mi
离心后混合物分为下层红色的酚、氯仿相中间相和无色的上层水相。RNA分布于上层水相水相占总体积60。取上清液转人另一样品管并加人05mL异丙醇混匀后室温放置10mi
；4℃下12000rmi
离心10mi
。弃上清液并用焦碳酸二乙酯DEPC处理过的双蒸水ddH20配置的75乙醇1mL洗涤沉淀物振摇后沉淀。然后在4℃下7500rmi
离心5mi
。真空干燥510mi
或吸尽乙醇开盖挥发弃上清液，敞开关口凉干沉淀最后溶沉淀于50uLRNasefreeddH2O中。70℃保存。
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