及基因之间的相对位置与方向空间定位精确
f2荧光原位杂交探针的类型FISH技术种类甚多发展迅速其实现需要获得能与靶序列互补结合的探针常用的探针有以下三类1染色体重复序列探针主要是指着丝粒α卫星DNA重复序列探针和端粒重复序列探针用以检测染色体数目异常同时由于G显带时端粒区是苍白的因此涉及此区的易位常难以检测而应用端粒探针则弥补了G显带的不足2染色体涂染探针包括通过流式分选或显微切割获得的全染色体或染色体臂以及特异性区带的涂染探针用以检测染色体数目或结构异常3染色体单一序列探针包括各类人工染色体探针如酵母人工染色体yeastartificialchromosomeYAC细菌人工染色体bacterialartificialchromosomeBACP1人工染色体P1artificialchromosomePAC探针主要用以识别染色体的易位缺失和扩增α卫星DNAalphasatelliteDNA是唯一一个存在于所有人类染色体着丝粒区域的着丝粒DNAce
tromereDNACENDNA家族由171bp的单体为单位组成的高度串联重复片段重复数百次至数千次跨越长达100kb的着丝粒DNA区域其杂交将产生很强的杂交信号因此常被选为着丝粒探针的来源
TheWellcomeTrustSa
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Cambridge由WellcomeTrust和BritishMedicalResearchCou
cil联合建立是世界上较早开展人类基因组大规模测序并具有相当实力的测序中心该中心利用能容纳大片段人类基因组DNA的高容量载体如粘粒BACPAC等构建了大片段人类基因组DNA文库通过文库中末端相互重叠的DNA片段连接成叠连群co
tig并与鸟枪法相结合
f加快了基因组测序实现了人类基因组计划Huma
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omeProjectHGP中人类基因组的物理作图physicalmappi
g和基因组测序相结合的目标因此这些克隆文库为基因定位研究提供了丰富的DNA序列资源NCBIClo
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formatics和httpge
omeucscedu提供的网络生物信息学资源也记载了许多克隆基因组定位的详细信息为我们选择相应克隆为作为染色体单一序列和端粒探针的来源提供了便利大片段人类基因组DNA文库的构建过程
常用的BACPAC文库
人类基因组的鸟枪法测序和物理作图
f定位检索BACPAC克隆的常用数据库
荧光原位杂交探针的制备和荧光原位杂交实验流程
第一天缺口平移标记探针11试剂准备
f101mmolLdNTP03mmolLdATP03mmolLdCTP和03mmolLdGTP等体积混合201mmolLdTTP1倍体积的03mmolLdTTP和2倍体积的三蒸水混合12缺口平移体系和反应条件01mmolLdTTP65l01mmolLdNTP10l10×NickTra
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