荧光原位杂交FISH探针的制备及其应用
概述1克隆性染色体异常是肿瘤的特征2染色体异常常见的类型3染色体异常的检测方法二荧光原位杂交及其探针1荧光原位杂交的原理2荧光原位杂交的探针三荧光原位杂交探针的制备和荧光原位杂交按试验流程介绍一概述1克隆性染色体异常是肿瘤的特征1914年德国遗传学家Boveri就提出染色体畸变与肿瘤起源相关然而这还仅仅只是一个假说1960年Nowell和Hu
gerford在7例慢性髓系白血病chro
icmyeloidleukemiaCML的患者中发现后来被称为费城染色体Philadelphiachromosome的微小染色体1973年Rowley证实了Ph染色体是9号和22号染色体易位所致这是人们在肿瘤中认识到的第一个染色体易位目前已经有11500篇文献报道了55600多种克隆性细胞遗传学异常这些染色体畸变尤其是染色体易位及其相应的融合基因在肿瘤致病的起始阶段有着重要的作用无不说明克隆性细胞遗传学异常是肿瘤的特征在肿瘤起源中起重要作用
f下图是各种疾病报告的克隆性染色体异常病例数
f2染色体异常的常见类型染色体异常指数目异常和结构异常两类前者包括整条染色体数目的扩增和缺失后者包括染色体易位插入倒置区带的缺失或扩增等下图是染色体数目异常
f染色体结构异常
3染色体异常的检测方法染色体异常的识别得益于二十世纪六十年代后发展起来的胰蛋白酶姬姆萨染色和常规显带技术使得常规筛查全基因组染色体异常和检测染色体核型改变成为可能染色体显带是细胞遗传学分析技术中标准和常用的方法但耗时且依赖于获得良好的分裂相还难于分析复杂和隐匿的异常
fPCR或荧光原位杂交FISHfluoresce
ti
situhybridizatio
对染色体异常的检出依赖于引物或探针与模板的结合因此较常规显带具有更高的特异性是高通量检测染色体异常的敏感和特异的方法
荧光原位杂交及其探针1荧光原位杂交的原理染色体荧光原位杂交始于传统的细胞遗传学和DNA技术的结合这种结合开创了一门新的学科分子细胞遗传学其基础是Souther
blot原理以半抗原如生物素地高辛间接标记或以荧光素直接标记的已知核酸分子为探针探针和靶序列双链DNA变性后杂交互补的异源单链DNA分子在适宜的温度和离子强度下退火形成稳定的异源双链DNA通过荧光标记的亲和素或抗地高辛抗体将半抗原显示出来通过荧光显微镜观察杂交信号FISH具有快速灵敏特异性好的特点可同时分析分裂期和间期的多个细胞并进行定量可以检测隐匿或微小的染色体畸变以及复杂核型还可以使用多种荧光标记显示DNA片段r