获取（三种方法）
1从基因文库中获取：
（1）分类：①基因组文库：含有某种生物的全部基因；②cDNA文库：含有某种生物的部分基因
高中生物基础知识总结
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f麻城一中生物校本教材（三）
（2）基因文库的构建过程：略（课本P10；注意两种文库的区别）
2PCR技术扩增目的基因
（1）概念：短时间内在体外大量复制DNA的技术。
（2）原理：DNA双链复制
（3）条件：模板、Taq酶、引物（单链DNA片段，能与模板链互补配对）、4种脱氧核苷酸
（4）过程：变性→退火→延伸
3通过DNA合成仪用化学方法人工合成：目的基因比较小，核苷酸序列已知
第二步：基因表达载体的构建（核心步骤）
1目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在和表达，并且可以遗传给下一代
2组成：目的基因＋启动子＋终止子＋标记基因（复制原点）
（1）启动子（RNA聚合酶结合位点）：位于基因的首端，能驱动基因转录出mRNA
（2）终止子：位于基因的尾端，终止转录
①启动子和终止子位于DNA上；起始密码子和终止密码子位于mRNA上
②真核生物的基因结构
非编码区：不能转录出mRNA但能调控基因的表达（含有启动子和终止子）
基因
外显子：转录出的mRNA能翻译出蛋白质
编码区（原核生物的基因无外显子和内含子之分）
（能转录形成mRNA）内含子：转录出的mRNA不能翻译出蛋白质（加工时被剪切）
第三步：将目的基因导入受体细胞
1转化：目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程
2常用的转化方法：
①导入植物细胞：主要是农杆菌转化法，其次还有基因枪法和花粉管通道法等
农杆菌能感染双子叶植物和裸子植物（植物受损伤时，伤口处细胞分泌大量酚类化合物，吸
引农杆菌移向这些细胞），农杆菌中Ti质粒的TDNA能转移至受体细胞，并整合到受体细胞
染色体的DNA上
②导入动物细胞：最常用的方法：显微注射技术。受体细胞：受精卵
③导入微生物细胞：原核生物作为受体细胞的优点：繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少最常用的原核细胞是大肠杆菌，方法：感受态法（Ca2处理法，增强细胞壁的通透性）
第四步：目的基因的检测与鉴定
目的基因是否成功导入：DNA分子杂交技术（用到基因探针）
分子水平目的基因是否成功转录出mRNA：分子杂交技术（从细胞中提取mRNA，用
检测
基因探针与其杂交，观察是否形成杂交带）
目的基因是否成功翻译成蛋白质：抗原抗体杂交技术
个体水平鉴定：做抗虫、抗病接种实验；或将植物移栽至盐碱地等
①基因探针：用放射性同位r