麻城一中生物校本教材（三）
选修3《现代生物科技专题》知识点总结
专题1基因工程一、基因工程的概念：
基因工程是指按照人们的愿望，通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。又叫做DNA重组技术
操作水平：DNA分子水平；优点：①定向改造生物性状（与诱变育种相比）；②克服远缘杂交不亲和障碍（与杂交育种相比）二、基因工程的基本工具1“分子手术刀”限制性核酸内切酶（限制酶，不能切割RNA和单链DNA）（1）来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。（2）功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列（含4到8个核苷酸的回纹序列），
并且使特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性（3）结果：产生黏性末端或平末端。2“分子缝合针”DNA连接酶1分类：EcoliDNA连接酶（来源于大肠杆菌）和T4DNA连接酶（来源于T4噬菌体）EcoliDNA连接酶只能连接黏性末端；而T4DNA连接酶能连接两种末端，但连接平末端的效率较低2与DNA聚合酶作用的异同DNA聚合酶只能将单个脱氧核苷酸加到单链DNA片段的末端，合
成子链。DNA连接酶是连接两个DNA片段3RNA聚合酶的作用部位：磷酸二酯键和氢键；解旋酶的作用部位：氢键
DNA连接酶、DNA聚合酶、限制酶、DNA（水解）酶的作用部位：磷酸二酯键3“分子运输车”载体（1）载体具备的条件：①能在受体细胞中复制并稳定保存
②具有一至多个限制酶切位点，便于目的基因的插入③具有标记基因，便于目的基因的鉴定和筛选标记基因：合成荧光蛋白的基因或抗性基因（如抗青霉素基因）（2）最常用的载体是质粒是细胞质中一种裸露的小型环状DNA，并具有自我复制能力（3）其它载体：λ噬菌体的衍生物、动植物病毒
注意：1目的基因：主要是指编码蛋白质的基因，也可以是一些具有调控作用的因子
2获得目的基因一般要切2个切口，产生4个黏性末端
3一般用同种限制酶切割目的基因和质粒，以获得相同的黏性末端，利于重组质粒的构
建（但可能导致目的基因自身环化）
4用两种限制酶同时切割目的基因和质粒，可防止目的基因和质粒自身环化（还可以防
止目的基因反向连接）
5原核生物体内的限制酶不切割自身DNA的原因：原核生物的DNA中不存在该酶的识别
序列或识别序列已经被修饰
6基因工程得以实现的理论基础：
①不同生物的DNA分子结构基本相同；②所有生物共用一套遗传密码
二基因工程的基本操作程序
第一步：目的基因的r