以在水中展开,这时可适当地在水中加入几滴乙醇。切片时展片:有些组织在切片后难以在水中展开,这时可适当地在水中加入几滴乙醇。后难以在水中展开
f37℃过夜,温度太高或时间太长,抗原容易丢失。(4)烤片:60℃30分钟或37℃过夜,温度太高或时间太长,抗原容易丢失。烤片:60℃(5)蜡块及切片的保存:最好在4℃保存蜡块及切片的保存:(6)脱片问题:脱片问题:PolyLysi
e多聚赖氨酸为目前免疫组化染色工作中最常用的一种防脱片剂,6mlPolyLLysi
e多聚赖氨酸为目前免疫组化染色工作中最常用的一种防脱片剂,的多聚赖氨酸溶液可按110稀释成60ml多聚赖氨酸的工作液,适合于需要酶消化、微波、高温高压的防脱片处理。如不行,可用双重处理(APES和PolyLLysi
e)的切片。在以的工作液,适合于需要酶消化、微波、高温高压的防脱片处理。如不行,可用双重处理(PolyLysi
e)的切片。上两种条件都行不通的情况下,可用如下方法:切片在脱蜡前,1:分钟,晾干,即可进行下一步。上两种条件都行不通的情况下,可用如下方法:切片在脱蜡前,放在APES1:50丙酮溶液中浸泡3分钟,晾干,即可进行下一步。系统:3双氧水灭活双氧水灭活;系统:灭活。(7)灭活内源性酶:HRP系统:3双氧水灭活;AP系统:3HAc灭活。灭活内源性酶:(8)暴露抗原:对于石蜡切片的免疫组化实验时,必须采用高温加热抗原修复,这将有助于暴露抗原决定簇,从而增加免疫暴露抗原:对于石蜡切片的免疫组化实验时,必须采用高温加热抗原修复,这将有助于暴露抗原决定簇,组化染色的强度不同抗体的最佳修复液请参阅抗体说明书对于不同的组织,不同的抗原,不同的抗体,组化染色的强度不同抗体的最佳修复液请参阅抗体说明书。对于不同的组织,不同的抗原,不同的抗体,所采用的方法应不一样,可进行热修复、胰酶消化、既不修复也不消化。胶原还可以用胃蛋白酶消化等。可进行热修复、胰酶消化、既不修复也不消化。胶原还可以用胃蛋白酶消化等。(9)封闭:在山羊血清封闭,非特异性染色仍然较强时,可延长封闭时间或用浓缩血清封闭封闭:在山羊血清封闭,非特异性染色仍然较强时,可延长封闭时间或用浓缩血清封闭稀释的抗体一定要当天使用。(10)抗体稀释:应遵循“现用现配”的原则,对于PBS稀释的抗体一定要当天使用。10)抗体稀释:应遵循“现用现配”的原则,(11)背景高:在抗体浓度、反应时间、反应温度等合适的条件下,如果背景依旧高,可采用含1‰Twee
20的PBr