：a抗体浓度过高或孵育时间过长降低抗体滴度、抗体孵育时间：室温1小时或4度过夜20b孵育温度过高超过37度一般在室温2028度分钟，cDAB显色时间过长或浓度过高显色时间不超过512分钟，以显微镜下观察为准2、非特异性背景染色a操作过程中冲洗不充分每步冲洗3次每次5分钟b组织中含过氧化物酶未阻断可再配置新鲜3H2O2封闭孵育时间延长c组织中含内原性生物素正常非免疫动物血清再封闭d血清蛋白封闭不充分延长血清蛋白封闭时间3、染色弱抗体浓度过低、提高抗体浓度、a抗体浓度过低、孵育时间过短提高抗体浓度、孵育时间不能少于60分钟试剂超过有效使用时间b试剂超过有效使用时间应更换试剂应防止切片干燥）c操作中添加试剂时缓冲液未沥干每步滴加试剂前沥干切片中多余的缓冲液使试剂稀释（应防止切片干燥）30d室温太低低于15度要改放在37度孵育箱孵育3060分钟或4度冰箱过夜e蛋白封闭过度封闭不要超过12分钟4、染色阴性a操作步骤错误应重试设阳性对照b组织中无抗原设阳性对照以验证试验结果c一抗与二抗种属连接错误仔细确定一抗二抗种属无误
免疫组化操作要点及技巧
4的多聚甲醛固定液对于冰冻切片，甲醛固定有时比冰冻丙酮好；但对于不同的组织和抗原的多聚甲醛固定液。组织和抗原，（1）固定：最好用4的多聚甲醛固定液。对于冰冻切片，甲醛固定有时比冰冻丙酮好；但对于不同的组织和抗原，可选用不固定：同的固定液。有时候商品化的抗体会有比较适合而推荐的固定液，请于购置前注意说明书。同的固定液。有时候商品化的抗体会有比较适合而推荐的固定液，请于购置前注意说明书。固定液：750ml，250ml，50ml，其对组织的穿透力较强，固定较好，结构完整，但因偏酸，Boui
S固定液：饱和苦味酸750ml，甲醛250ml，冰醋酸50ml，其对组织的穿透力较强，固定较好，结构完整，但因偏酸，对抗原有一定损害，且组织收缩明显，不适于组织标本的长期保存。对抗原有一定损害，且组织收缩明显，不适于组织标本的长期保存。即高碘酸钠赖氨酸多聚甲醛，适于固定石蜡切片。适于富含糖类组织，对超微结构及许多抗原的抗原性保存较好。PLP液：即高碘酸钠赖氨酸多聚甲醛，适于固定石蜡切片。适于富含糖类组织，对超微结构及许多抗原的抗原性保存较好。（2）组织脱水，透明：时间不能太长，否则在切片时容易碎片，切不完整。组织脱水，透明：时间不能太长，否则在切片时容易碎片，切不完整。（3）切片时展片：有些组织在切片后难r