HPLC法测定石斛兰中内源激素的含量
谢艳丽12，张名楠12，周雪晴12，章程辉3【摘要】建立高效液相色谱（HPLC）测定石斛兰中内源激素GA3、IAA、ABA的检测方法。石斛兰植株经80冷甲醇匀浆提取，PVPP及C18SPE小柱净化，调整酸度后经乙酸乙酯萃取，氮气吹干后用甲醇溶解。以甲醇∶乙腈∶磷酸盐缓冲液（体积比15∶15∶70，pH35）为流动相，采用Waters
ovapakC18柱分离，UV210
m检测，外标法定量。结果表明，方法的平均回收率为842～954，RSD为47～58，检出限为002～006mgkg，整个提取分离、分析测定流程简便、快速、准确，适合用于石斛兰植株中内源激素的分析测定。【期刊名称】广东农业科学【年卷期】2011038017【总页数】2【关键词】高效液相色谱；石斛兰；内源激素内源激素是植物体内自身合成的微量有机物，对植物的生长发育有重要的调控作用，是植物生理学研究的主要对象。但其性质不稳定、含量低、易受细胞中其他成分干扰，所以准确定量比较困难13。高效液相色谱法用于检测植物内源激素的报道已有很多48，但大多存在流程繁琐、耗时、分离效果差、峰形不良等问题。本研究采用了一种相对简单的前处理方法，从石斛兰植株中提取出赤霉素（GA3）、3吲哚乙酸（IAA）和脱落酸（ABA），用高效液相色谱检测，能有效地提取目标物，去除杂质干扰，灵敏度较高、重现性较好，用于实际样品分析，获得了比较满意的结果。
f1材料与方法
11试验材料内源激素标样GA3，ABA，IAA及交联聚乙烯吡咯烷烃（PVPP）均由德国Sigma公司出品；甲醇为色谱纯；乙酸乙酯、磷酸为分析纯。仪器：2695液相色谱仪（美国Waters公司）。12试验方法121样品处理准确称量10g剪碎后的植株样品，加入10mL80（vv）的冷甲醇（4℃），13000rmi
匀浆3mi
，放于冰箱冷藏过夜。于4℃下以8000rmi
离心10mi
，上清液置于50mL的离心管，残渣用8mL甲醇分两次离心提取，合并上清液。在上清液中加入02gPVPP，充分摇匀后以8000rmi
离心10mi
，上清液过C18小柱后用氮气吹干，加入1mLpH30的磷酸盐缓冲液溶解，再用乙酸乙酯等体积萃取3次，合并有机相。将有机相用氮气吹干，加入1mL甲醇，混匀后用022μm有机滤膜过滤，置于样品瓶待测。122色谱条件色谱柱：Waters
ovapakC18色谱柱（39cm×15cm×5μm）；流动相：甲醇∶乙腈∶磷酸盐缓冲液（pH35）15∶15∶70；流速：1mLmi
；检测波长：210
m；进样量：10μL。以标样保留时间定性，外标法峰面积定量。
2结果与分析
21流动相的选择HPLC中流动r