高效液相色谱法和紫外吸收法在蛋白质测定中的应用
摘要：随着生物技术的迅速发展，蛋白质的研究越来越广泛，重要，蛋白质分离分析测定技术对蛋白质组学、生物化学及整个生命科学的发展具有十分重要的意义。本文重点介绍一下高效液相色谱和紫外吸收在蛋白质测定中的应用。关键词：蛋白质；高效液相色谱；紫外吸收
蛋白质是生物体中广泛存在的一类生物大分子，由核酸编码的α氨基酸之间通过α氨基和α羧基形成的肽键连接而成的肽链，经翻译后加工而生成的具有特定立体结构的、有活性的复杂的生物大分子。而且随着生物技术的迅速发展，越来越多地在体外通过各种生物工程的途径被人工制造出来，造福于人类，近年来，随着人们对蛋白质分子结构的深入研究，特别是在后基因组时代，蛋白组学已经成为功能基因组学研究的重要领域，蛋白质分离分析测定技术对蛋白质组学、生物化学及整个生命科学的发展具有十分重要的意义。此外蛋白质是构成生物体细胞组织的重要成分食物中的蛋白质是人体中氮的唯一来源，具有糖类和脂肪不可替代的作用。蛋白质与营养代谢，细胞结构、酶、激素、病毒、免疫、物质运转、遗传等密切相关，其分离与定性、定量分析是生物化学和其它生物学科、食品检验、临床检验、诊断疾病、生物药物分离提纯和质量检验中最重要的工作。目前测定蛋白质含量的方法有很多，如高效液相色谱法，紫外吸收法等。一．高效液相色谱法在蛋白质测定中的应用高效液相色谱法（HighPerforma
ceLiquidChromatographyHPLC）以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。它可用来进行液固吸附，液液分配，离子交换和空间排阻色谱分析。高效液相色谱有五个特点：①压：流动相为液体，流经色谱柱时，受到的阻力较大，为了能迅速通过色谱柱，
必须对载液加高压。②高效：分离效能高。可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果，比工业精馏
塔和气相色谱的分离效能高出许多倍。③高灵敏度：紫外检测器可达001
g，进样量在μL数量级。
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应用范围广：百分之七十以上的有机化合物可用高效液相色谱分析，特别是高
沸点、大分子、强极性、热稳定性差化合物的分离分析。⑤分析速度快、载液流速快：较经典液体色谱法速度快得多。
高效液相色谱法分离蛋白质的基本原理HPLC液泵将流动相以稳定的流速r