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全性好和环保等优点,在现代工业生产中被广泛用作生产菌种,其发酵生产的酶已在食品、饲料、洗涤、纺织、皮革、造纸和医药等领域均
f发挥着十分重要的作用。枯草芽孢杆菌生境多样,可利用的营养物质种类十分丰富,这决定了其自身含有丰富的产酶系统,具备生产多种酶的应用潜力。研究资料表明,枯草芽孢杆菌能够产生蛋白酶、α2淀粉酶、纤维素酶、β2葡聚糖酶、植酸酶、果胶酶和木聚糖酶等十几种酶4。枯草芽孢杆菌生产的蛋白酶、淀粉酶是工业酶中应用最为广泛的酶,仅二者就占到了整个工业酶市场的505。其中,淀粉酶的生产和应用处于整个酶制剂的首位,其最早是在20世纪初,由德国的Boide
和Effro
t先后从枯草芽孢杆菌培养液中分离出的;蛋白酶主要用于制革、丝绸工业及制造加酶洗涤剂等方面。
1材料1.1菌种来源:河西学院三教后的树林中的土壤。1.2培养基:淀粉培养基可溶性淀粉1、蛋白胨1、葡萄糖05、NaCl05、牛肉膏05、琼脂粉08。1.3器皿:试管,量筒,移液管,培养皿,洗耳球,玻璃棒,酒精灯,接菌环,三角瓶等。1.4仪器:高压蒸汽灭菌锅,电炉,恒温培养箱,摇床,天平等。1.5其他:纱布,棉花,棉绳等。2方法2.菌种的筛选2.1初筛:2.1.1配制培养基:按照上述培养基成分及数量称取各物质,放入三角
f瓶中,加水到100ml,包扎。和包扎好的试管、移液管、涂布器、培养皿等一起放如灭菌锅中120℃高压灭菌20mi
。2.1.2倒平板:把培养基置于无菌工作台上,待冷却到55℃左右后,倒入灭菌后的平板中,每个平板中约1520ml,之后待冷却凝固。2.3菌悬液制备从三教后的树林中利用五点采样法采集土样,1.称取5g,放入装有45mL无菌水的三角瓶中,震荡20mi
后静置5mi
2.1.4浓度稀释:在无菌试验台上进行浓度梯度稀释把土样摇匀,从中吸取1ml置于事先灭好菌的试管中,再加入9ml无菌水,再从该试管中吸取1ml土样置于另一只无菌试管中,加入9ml无菌水,依次稀释到106,待用。2.1.5涂布平板:分别在104、105、106浓度下各取1ml土壤稀释液倒入已冷却的平板中,用涂布器涂布均匀,在平板上标注土样的浓度。把标注好的培养皿放入37℃培养箱中培养24h。取出培养好的平皿,在长出的菌落上滴加碘液,菌落周围如有无色透明圈出现,说明淀粉被水解,即该菌株能产生淀粉酶。2.2复筛2.2.1平板划线:用上述配制培养基和到平板的方法再制得培养基,用灭过菌的接菌环从上述培养皿中挑去菌落周围透明圈和菌落直径比值较大的菌落在新配置的培养r
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