琼脂糖凝胶电泳法分离预染血清脂蛋白
【目的】1掌握琼脂糖凝胶电泳法分离预染血清脂蛋白的实验原理和操作方法。2熟悉血清脂蛋白改变在临床上的重要意义。【原理】电泳是指带电颗粒在电场的作用下，向着与其自身所带电荷相反的电极移动的现象。根据电泳支持物的不同，血清脂蛋白电泳可分为滤纸电泳、醋酸纤维薄膜电泳、琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳四类。由于各种脂蛋白所含载脂蛋白和脂类的种类及数量不同，分子量大小相差较大，并且在一定pH值溶液中所带电荷量不同，电泳移动的速度必然有差别，因此，通过电泳可以将不同种类的血清脂蛋白彼此分离。血清脂蛋白经苏丹黑B预染后，以琼脂糖为载体，在pH86巴比妥缓冲液中进行电泳，可将脂蛋白分成不同的区带（图39）。正常人空腹状态下，血清脂蛋白电泳后可出现三条区带，从阳极到阴极依次为α脂蛋白带、前β脂蛋白带及β脂蛋白带。点样槽处不会出现乳糜微粒，有时前β脂蛋白也显示不出来。区带的宽窄及颜色的深浅粗略地反应了各种脂蛋白的量。另外，可以将已烘干的凝胶片直接放到吸光度扫描仪上，通过扫描得出各种脂蛋白的百分比含量。或者，将电泳后凝胶板上各区带切下，比色定量分析出各种脂蛋白的百分比含量。
图39预染血清脂蛋白电泳图谱【器材】1．电泳仪
f2．恒温水浴箱3．离心机4．微量加样器5．烫槽器6．载玻片7．扫描仪8．分光光度计9．小号试管10．吸管11．纱布12．烘箱【试剂】1．电泳缓冲液（pH86，离子强度0075的巴比妥缓冲液）称取巴比妥钠15458g，巴比妥2768g，乙二胺四乙酸（EDTA）029g，加适量蒸馏水溶解后加至1000ml。2．凝胶缓冲液（pH86三羟甲基氨基甲烷缓冲液）称取三羟甲基氨基甲烷1212g，EDTA029g，NaCl585g，用适量蒸馏水溶解后加至1000ml。3．琼脂糖凝胶（1）称取琼脂糖1g，溶于50ml凝胶缓冲液中，再加蒸馏水50ml，然后在水浴中加热至沸腾，待琼脂糖完全溶解后立即停止加热并分装于试管中，冰箱4℃保存，备用。4．苏丹黑B染色液将适量苏丹黑B加到无水乙醇中至饱和，震荡使之乙酰化，用前过滤。5．固定液
f取冰醋酸5ml加75乙醇95ml。6．预染血清取空腹血清018ml，加苏丹黑B染色液002ml，混合后置于37℃水浴中染色30mi
，2000rmi
离心约5mi
以除去悬浮于血清中的染料沉渣，取其上清液即为预染血清。【操作】1．制备琼脂糖凝胶板将已配制好的091琼脂糖凝胶于沸水浴中加热融化，用吸管吸取凝胶溶r