端粒相关蛋白在某些重大疾病中的调节机制揭示宫颈癌中端粒酶的调控机制，尤其是端粒相关蛋白磷酸化及其在基因转录水平上的调控，提出抑制肿瘤细胞永生化的新策略。研究端粒相关蛋白在特异性肺纤维化的作用。研究方法及内容：（1）端粒相关蛋白质磷酸化与去磷酸化在宫颈癌细胞中的调控机制前期研究表明，端粒酶磷酸化后，将会提高端粒酶活性；反之蛋白磷酸酶2A去磷酸化，抑制端粒酶活性。通过点突变筛选22个潜在的TERT磷酸化位点，我们发现两个可能性高的磷酸化位点，分别位于TERT蛋白C末端和中心序列的丝氨酸残基。我们将以宫颈癌细胞为模型，研究TERT磷酸化的机制，确定参与TERT磷酸化的蛋白激酶及其信号通路。待检查的蛋白激酶包括ATRATM和DNA依赖性蛋白激酶。我们将研究磷酸化和去磷酸化的TERT与hTERC与端粒DNA以及与其它端粒相关蛋白复合体的相互作用。研究POT1磷酸化对其调控的机制，尤其是与端粒酶及端粒DNA相互作用和转换机制。我们推测，在POT1TPP1招募TERT与端粒DNA结合、在端粒DNA与不同的端粒蛋白复合体切换过程中，蛋白质磷酸化去磷酸化是一个重要的开关式调节机制。我们将应用重组的蛋白质研究磷酸化对蛋白之间、蛋白和端粒DNA之间的相互作用。在临床宫颈癌标本和培养的细胞内，在鉴定基因表达后，通过免疫沉淀、质谱分析及磷酸化标记等方法，确定端粒相关蛋白的磷酸化调控机制。用不同突变体和抑制剂及免疫去除等方法作特异性对照，鉴定端粒相关蛋白磷酸化对端粒长度的影响和对细胞分裂的作用。（2）表观遗传学及FOX基因转录抑制因子在宫颈癌细胞中对TERT基因转录调控机制在端粒酶调控的机制中，激活TERT基因转录是关键的一个环节，TERT基因转录主要调节因子包括cmycSp1和Ets2。本研究将实时测定宫颈癌细胞中TERT表达、TERT启动子转录活性和TERT全长启动子DNA甲基化。应用ChIP及ReChIP技术系
f统分析不同细胞周期TERT全长启动子（9kb）与各种不同转录因子的结合，绘制TERT全长启动子DNA甲基化、DNA甲基转移酶、各种组蛋白修饰酶的募集和组蛋白H3（H3K9、K14）、H4（H4K5、12、16）乙酰化，甲基化（H3K4、K9，K27、K36，H4K20）状态的图谱。确定特异转录因子与不同组蛋白修饰酶募集的相关关系，最终阐明肿瘤细胞在不同信号通路整合后的TERT基因调控网络。我们将研究TGFT下游FOX蛋白对TERT基因的调节作用，包括与其它基因转录因子（如cmyc和Ets2）以及对癌细胞增殖的调节作用。FOX蛋白特征是有一个叉头的结构域，由8r